危险，既可以指危及人身安全，即有毒物品，也可以指导致实验失败的因素。本文所说的危险，指的是第二种含义。

 

很多因素都可以影响实验的成败，一个小小的失误，可能就会毁掉一个实验。而有些因素，却可能导致很多实验都失败。这样的因素，便是我所认为的“实验室里最危险的东西”。

 

1.       空气

 

我们不是在真空里面做实验，即使大部分时候试剂是盖上的，但是总有接触空气的时候。如果空气质量不好，例如灰尘含量过高，细菌、真菌含量太多，就非常容易污染试剂，导致实验失败。

 

所以，最好定期检测空气的质量。可以用不加氨苄西林的LB培养皿暴露于空气中一小时，然后37度孵育一天，看有多少细菌克隆来检测细菌含量（这个我没做过），用加氨苄西林的LB培养皿暴露于空气中一小时，室温下避光孵育3天，看有多少真菌克隆来检测真菌含量。如果细菌和真菌很多，一定要非常注意无菌技术。

 

我曾经用LB培养皿检测过空气中的真菌，结果见下图。但是，专门用于培养真菌的Sabouraud Agar plate http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/3156-sabouraud-agar-for-fungal-growth-protocols 应该效果更好。

 

     

这是我在做大肠杆菌培养的时候发现有真菌污染之后做的空气中真菌含量检测。左侧是放在试验台上一个小时，右侧是放在室外一个小时。可见，室内空气中有真菌，但是比室外要少。

 

为了保持实验室内的空气质量，应该定期打扫实验室，因为地板、实验台上的灰尘在走动时会扬起，角落里的垃圾可能是细菌和真菌的良好培养基。同时，一般来说实验室外面的空气中细菌真菌含量高于实验室内，所以最好不要开窗。

 

2.       水

 

几乎所有的试剂都是在溶液中起反应，所以做实验的时候，一定要保证水的质量合格。如果水的质量不达标，实验失败在所难免。我就在网上看到有人说当他们用Milli –Q water去清洗玻片的时候，组织从玻片上掉下来，而换用普通的水之后，问题就消失了， 见http://www.ihcworld.com/smf/index.php?topic=2401.0 （当然，这个不一定完全可靠，因为没有做严格的对照和重复）。在《At the Bench》一书里，作者写道：很多人都知道，有些实验仅仅是因为换了一种配溶液的水就做不出来了。

 

在我们这里，如果系统没有问题的话，Milli-Q 水可以满足绝大部分实验的要求。对于用水纯度要求高的实验，例如原位杂交，最好用公司购买的配好的溶液。如果实验出现问题怀疑是水的质量所致，可以用公司购买的水作为对照检验其质量。

 

3.       Pipette（移液器）

 

几乎所有操作都要用到移液器，如果移液器污染，则可能导致实验失败。所以，要保持移液器清洁，移液的时候，要防止液体进入移液器。有些实验例如RNA操作，最好用filter tip 以防止移液器里的RNase或者微生物进入样品。

 

去除移液器表面的RNase的方法：我从网上看到的方法是用10%的bleach清洗。但是导师说bleach会破坏移液器的塑料，所以他建议我先用普通的清洁剂清洗，然后用70%的酒精清洗。不知道有没有更好的方法？

 

4.       EP管和枪头

 

很多反应是在EP管中进行的，很多试剂分装于EP管中，绝大部分的移液都要用到枪头。如果EP管和枪头被污染，自然会对实验有影响。我所用过的EP管和枪头都没有遇到过问题，但是我记得曾经看过一篇SCIENCE的报道说一次性塑料实验用品会释放出微量的物质。作者在用单胺氧化酶B做试验的时候，发现酶的活性被抑制，于是检测了不同品牌的tube和tip，果然发现了能够抑制该酶活性的物质：di(2-hydroxyethyl)methyldodecylammonium，9-octadecenamide。他们检测的品牌包括著名的Fisher Scientific(1)。

 

绝大部分的EP管和枪头都注明是“DNase and RNase Free”，但是，专门生产RNase抑制剂的Ambion公司却说不一样是RNase free。所以，最近我在做原位杂交的实验时，就检测了EP管的RNase。一管用氯仿清洗，一管不清洗，然后加入RNA，37度孵育一小时，电泳，结果没有区别。当然，我孵育的时间不是很长，样本量不大，也没有重复。

 

一般来说，EP管和枪头不会对实验有太大的影响，尤其是来自于知名品牌的产品。如果是非知名品牌，或者需要做非常敏感的实验，还是有必要检测的。

 

5.       过期的试剂

 

过期失效的试剂导致实验失败是再正常不过的了。所以，一般情况下不要使用过期的试剂，尤其不能使用别人的留下的过期试剂（我曾经有过血的教训）。有些试剂，例如抗体、酶，是容易变质的，但是，一般情况下过了产品说明书所说的保质期还可以用。因为这些试剂比较贵，所以一般过了保质期还会继续使用。使用这样的试剂，如果不清楚是否依然有效，就要设立对照来检验。例如，对于限制性内切酶，可以用已知不耐受酶切的质粒+没有问题的buffer作为一个对照，检验酶的活性。

 

 

最安全的地方就是最危险的地方，最不容易想到的导致实验失败的因素就是实验室里最危险的东西。以上所说的情况，一般都不会有问题，但是如果实验失败，检测了很多因素还是找不到原因，可能就需要怀疑这几个因素了。

 

参考文献：

1.      G. R. McDonald et al., Science 322, 917 (Nov, 2008).

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