插片培养法

真菌作为一种重要实验材料，在微生物实验中的应用是相当普遍的，正确的培养观察方法，可以如实地反映其本质特征。插片培养法是实验室观察真菌形态的一种基本方法。

该方法简单易懂，应用范围广，在对真菌形态方面的显微观察中可以保证真菌的基本形态不被破坏，结构完整等特点。

其基本步骤是：

1，  倒平皿：将固体培养基倒入干净的培养皿中，厚度约0.3~0.5mm，待平皿凝固后进行后续试验；

2，  接种：接种快接种于凝固的培养皿中央；

3，  插片：用干净的镊子，将无菌的盖玻片以 45 度角的角度斜插入培养基中，插片位置与接种块之间距离一般为1.0~1.5cm；

4，  培养：适宜于真菌生长的环境下，倒置培养。待菌丝铺展开来，长过插片的位置后，即可取出玻片进行后续试验；

5，  制片：打开培养皿，用镊子轻轻将已经爬有菌丝的玻片取出，用软纸擦去玻片背面的菌丝及培养基，另取一个干净的载玻片，载玻片上滴一滴染料或蒸馏水，将玻片正扣在载玻片上。此时，菌丝在载玻片与盖玻片之间，避免制片过程中产生气泡。

6，  封片：封片的种类很多，可以用甘油、树脂等封片。更为简单有效的是，用透明的指甲油在上面做好的玻片四周涂抹封片，此封片方法最为简单实用，密封好的话，可以保存很久不干燥。

7，  观察：显微镜观察。

     注意事项，

1，  制片前的所有步骤都要严格无菌操作，避免污染。

2，  盖玻片的灭菌可以用湿热灭菌法，注意的是灭菌后要烘干处理，烘干的越彻底越好，这样能避免玻片间的粘连。

3，  插片的数量可以根据实验而定，最好不少于两个。可以错落着插片2~8个不等。

4，  以上制片方法，将染色和制片合二为一，根据具体实验而定。

5，  封片不是必须的，只为长久保存之用。