美丽的真菌世界分享 http://blog.sciencenet.cn/u/Macrofungi 菌物物语

博文

显微操作挑取单个孢子(孢子四分体的制备)

已有 10039 次阅读 2014-9-21 14:22 |个人分类:科研笔记|系统分类:科研笔记|关键词:学者| 孢子四分体, 食用菌育种, 单孢

食用菌育种中一个非常重要的材料——单孢菌株的获取。传统的单孢菌株获取通过稀释涂布法得到单菌落,通过对单菌落的验证得到单孢菌丝。但对一些没有明显标记的物种,这种稀释涂布就有一些盲目性。如没有锁状联合的物种(双孢蘑菇、以及大部分的子囊菌等)如何获得绝对的单孢材料却是一大难题。目前国内的食用菌领域还未见有通过显微操作实现单孢分离的实验方案。作者通过最近的几次实验摸索,逐渐熟练掌握一套简单有效的单孢挑取过程,现总结与大家分享。 


蘑菇孢子四分体

用具:酒精灯、带皮头的一次性采血管、载玻片、50%的无菌甘油、孢子材料、显微镜(倒置显微镜最好,有相差功能更好)、CYMPDA平皿等。

拉针:双手拿着采血管的两端,使采血管的中间某一点在酒精灯上加热至变软,迅速离开火焰,双手快速拉针,在拉针过程即将结束或感觉到玻璃针开始定型变硬的时候双手突然加力使玻璃针自然断裂。

样品制备:将孢子用50%的无菌甘油稀释,涂布在载玻片上置于显微镜(20×或40×)下对焦合适。

孢子挑取:下针右手持针,首先在显微镜上或台面上找一个可以右手依靠的固件,保持右手没有大的抖动,缓缓下针至在目镜中可以看到孢子材料和针,调整针的位置至待挑取的孢子材料的上方,使针尖斜对准孢子,落针。通常孢子材料会因为毛细管虹吸效应自然吸入针头内,如果没有吸入,也可以适当晃动将孢子粘附与针头上。挑到的孢子迅速转移至培养基已凝固好的平皿中(注意将孢子从针尖内吹出),每个平皿可以放置5个孢子材料。每个采血管只能使用一次。重新制针,挑取下一个孢子。

该实验需要一个熟练过程,重要的是如何使持针的手稳稳的移动。当然如果有显微操作仪就不用这么费事了。另外注意:1)载玻片上薄薄的涂布上一层甘油孢子样品即可,避免液体太多;2)整个过程不需要严格无菌,但主要工具保持干净可以有效的放置杂菌污染;3)最难的是如何让孢子自吸入针头内或粘附在针尖上。


四个孢子被依次挑取

该实验还可以可以扩展用于:

1)孢子四分体的获取。

2)病原菌分离

3)特殊无性孢子材料的单孢挑取

4)变态菌丝结构的获取




https://m.sciencenet.cn/blog-473092-829597.html

上一篇:残波盘菌
下一篇:羊肚菌栽培——无性孢子(2)

2 陈楷翰 杨正瓴

该博文允许注册用户评论 请点击登录 评论 (7 个评论)

数据加载中...
扫一扫,分享此博文

Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )

GMT+8, 2024-3-29 21:19

Powered by ScienceNet.cn

Copyright © 2007- 中国科学报社

返回顶部