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iSPIM反式平面光显微镜

已有 4367 次阅读 2013-6-16 06:13 |个人分类:评论|系统分类:科研笔记|关键词:学者| 显微镜, 平面

iSPIM显微技术使用两个垂直放置的物镜,一个用来照射样品,一个用来接受荧光,所以被照射的区域都被成像了,光效率高。iSPIM技术考虑了生物学研究的传统细胞和组织培养手段,我们可以直接成像培养皿或载玻片培养的样品。iPSIM使用了两个长工作距离,大数值孔径水浸的物镜,把他们按90度夹角装配在一起,固定在一个电动平移台上。左侧的物镜是激发物镜,把光平面引到样品上;右侧的物镜是收集物镜,把平面上的荧光信号成像到相机上。实验时,先用传统的倒置显微镜和左下侧的相机找到所要观察的样品,然后用电动平移台把iSPIM模块降下来,就开始用右上侧的照相机实时检测。整个过程方便,快速,生物学家仍然可以继续使用下面的物镜做传统的实验。因而iSPIM可以做成一个成本较低的商业模块,方便的配备到普通的倒置显微镜上,我们可以对具有倒置显微镜的客户群升级他们的显微镜具有iPSIM模块。

               

上图为iSPIM核心模块装置。两个长工作距离的水浸物镜被装在一个特制的90度机械臂上,并与载玻片成45度夹角。左侧的物镜引光入平台,右侧的物镜收光入照相机。在三维成像时,一个扫描振镜轴向扫瞄薄的平面光,同时检测物镜也自动上下移动,以保持检测的面总在焦平面上。iSPIM技术包括三个光学部分,一个硬件模块和一个软件程序。光路包括: (1)激发光路,即产生,旋转和轴向平移一个薄的平面光,主要的光学元件包括激光器,光纤,声光可调滤波器,球面透镜,柱面透镜,狭缝和扫瞄振镜;(2)iSPIM核心模块,即调节光平面的装置,主要包括特制的90度机械臂,两个长工作距离水浸物镜,可调节的反射镜,高精度压电陶瓷控制器和电动平移台;(3)接受光路,即成像系统,主要光学器件包括镜筒透镜,滤光片和相机。硬件模块主要包括扫瞄振镜,压电控制器和声光可控滤波器的驱动电路,相机的控制电路,以及多通道的采集卡。软件程序主要是控制三维图像的扫描和采集,以及图像的简单处理,比如去卷积运算,计算最大投影图片等等。

             

                     苏州大猫的第三代光纤偶合iSPIM反式平面光显微镜




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1 徐大彬

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