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分光光度的“零点”取舍: czy2010 2014-6-6 19:49; 在采用分光光度计标准曲线法测定样品某物质的的浓度时，常常在原点的取舍问题上疑惑不解，问过n个老师，答案和解释多种多样。偶一日突有所悟，所得如下。若有异议，敬请畅所欲言。原点，（0,0）点是一个“隐藏”的试验点。这一点在实验中和数据处理中十分重要。若线性偏离这点，说明试验中“空白”，“调零”有问题。如果，试验中“空白”，“调零”没有问题，这一点对线性关系的偏差应该为最小。个人总结：在进行线性回归计算时 1、若加入零点后R的平方急剧减少，而不加入零点时R的平方很高，说明实验数据的线性很好，处理数据时，不能把原点参与线性相关，得出的方程其有效作用域为实验数据的最小值到最大值之间，也就是利用该方程反推浓度时，样本的OD值要落在作标准曲线时的OD值的区间；（即为标准加入法） 2、如果把零点加入线性相关计算时对R的平方影响不大，甚至使其更大，说明从零点到实验的最大值之间都有很好的线性相关性。处理数据时要把原点加入标曲的计算。得出的方程的有效作用域为零到实验数据的最大值之间。也就是利用该方程反推浓度时，样本的OD值要落在从零到作标准曲线时的最大OD值的区间；（即为标准曲线法）由上可见，后者得出的回归曲线的应用范围更大，但是实验数据更为难得。另一方面也说明原点是否参与回归要具体情况具体分析，同时样本的OD值不一定非得落在标曲的数据范围内。也提醒我们在得到标曲的数据时要尽快分析其有效作用域，以利于后续样本数据的取舍。还需要进一步探讨的是怎么量化零点的取舍问题。当然取舍不定时还是保守为上。; 个人分类: 未分类|3997 次阅读|0 个评论

笨笨的。。。: 热度 2 aobo1988 2011-10-9 12:59; 以前总也想不通，为什么溶液本身不稳定，颜色变来变去的，那是因为没有离心有沉淀在啊，纯溶液一定是稳定的。。分光光度计的范围是0.2---0.8是准确的，测量的时候要稀释的啊。。才知道。。真是笨啊。。; 3579 次阅读|2 个评论

[转载]细胞计数及活力测定: plzlq2010 2011-6-5 16:15; 一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。二、仪器、用品与试剂 1、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分光光度计） 2、试剂：0.4％台盼兰，0.5％四甲基偶氮唑盐（MTT）、酸化异丙醇 3、材料：细胞悬液三、操作步骤（一）细胞计数 1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。 2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。 3、静置3分钟。 4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×10000 注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。（二）细胞活力 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。（三）MTT法测细胞相对数和相对活力活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。 l、细胞悬液以1000rpm离心10分钟，弃上清液。 2、沉淀加入0.5－1ml MTT，吹打成悬液。 3、37℃下保温2小时。 4、加入4—5 ml酸化异丙醇（定容）。打匀。 5、1000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色，酸化异丙醇调零点。注意：MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。附：1、0.4%台盼兰染液配制：台盼兰 0.4克加双蒸水至100 ml。 2、MTT配制： MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。 3、酸化异丙醇配制：异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。; 2205 次阅读|0 个评论

火焰光度计大哥: lengwa 2008-10-16 15:53; 最近在做一些土壤样品的基本理化性质，也就是土壤机械组成、pH值、有机质、全P、全N、全K等一些基本指标。这几天在做钾（我恨不得是作假呢）可能是仪器问题，也可能是个人水平不行，测了三天，失败三次。例如：一下数据是连续测量数据（11和12，39和40，分别为平行）几个连续数据编号读数 11 29.50 12 99.99 11 99.99 12 58.58 39 99.99 40 53.94 39 79.03 40 99.99 操作应该是没有问题的，看了说明书，请教了师兄师姐。三次实验，火焰至少都烧了2个小时以上；标线做完后，回测标准溶液时，也达到39.86/40.00=99.65%，和19.23/20.00=96.15%了，问题就是，过半小时后，再测40.00的标准溶液时，就只有不到16点多了。退一步，即使所有操作、标准溶液等等都错了，那么连续测定的同一个样品（见上表）也不能差这么多啊。所以得出结论：仪器肯定有问题。故，QQ签名：火焰光度计大哥，我投降了。三天三次都失败，我服你了！寻高手指点啊！跪求！; 个人分类: 实验风采|2772 次阅读|0 个评论

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