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Flow Jo软件分析调节性T细胞: 热度 2 FlowJo 2012-5-2 16:26; FlowJo 分析调节性 T 细胞作者：胡金涛调节性 T 细胞（ Treg ）是抑制性 T 细胞内的一种功能亚群。 Treg 细胞是一群表达特征为 CD4+CD25+Foxp3+ 的 T 淋巴细胞。 Treg 细胞来源于胸腺，占外周血 CD4+T 细胞的 2%-10% 。根据 Treg 的来源不同可以分为自然调节性 T 细胞（ nTreg ）和诱导产生的适应性调节 T 细胞（ a Treg ）两类。 Treg 细胞可以抑制 T 细胞增殖和分泌细胞因子，在防止发生自身免疫、控制肿瘤免疫和移植耐受方面发挥重要作用。 Treg 细胞缺陷或功能受损会引发很多自身免疫病，而 Treg 细胞增多则会抑制机体对病原体的免疫应答反应，因此， Treg 细胞是一群重要的免疫调节细胞，在调节机体免疫应答中起着不可或缺的作用。一、 FlowJo 分析 Treg 细胞数据的过程 1. 把 Treg 细胞样品的原始数据拖入 FlowJo 软件，双击打开原始数据。如 ( 图一 ) 所示： ( 图一 ) X 轴选择 FSC,Y 轴选择 SSC 。分析的细胞选择上图所示的淋巴细胞群进行分析。 2. 在 SSC/FSC 图中双击淋巴细胞群，（图二） X 轴选择 FITC-CD4, Y 轴选择 SSC, 圈出 CD4+ 的细胞。如（图二）所示： 3. 在 FITC-CD4/FSC 图中双击 CD4+ 的细胞群，（图三） X 轴选择 PE-CD25, Y 轴选择 APC- Foxp3 , 用四分门设门工具设门。如（图三）所示。二、 Treg 细胞结果分析 1. 结果分析的原则：检测 Treg 细胞一般采用三标记染色法。本实验中荧光抗体搭配如下： (CD4-FITC/CD25-PE/ Foxp3-APC) 。 Treg 细胞来源于 CD4+ 的细胞，分析时首先要圈出 CD4+ 的细胞，在 CD4+ 的细胞中分析双阳性细胞（ CD25+ Foxp3+ ），从而实现分析 Treg 细胞（ CD4+CD25+Foxp3+ ）。 2. 图三中 Q2 区域的细胞即为 Treg 细胞 (CD4+CD25+Foxp3+) ，检测的结果： 8.62% 。可以根据检测结果判断 Treg 细胞在调节机体免疫应答中的作用。三、 Treg 细胞结果输出分析结果的输出根据最终的需求可以有多种输出方式 1. 在细胞周期分析窗口工具栏中选择“文件”并单击，选择下拉菜单中的“另存为”，选择保存位置、重新命名文件名以及文件保存的文件类型（ SVG 、 PNG 、 EMF 、 JPG ）。 2. 把上述样品的分析应用到组中，在 Flow Jo 软件界面中单击打开布局编辑器，在工作台的样品空间把“淋巴细胞结点和 CD4+ 细胞结点”拖入布局编辑器中，单击布局编辑器右上角的 Batch 工具。输出整个实验组的数据。如（图四）所示：（图四）此博文中的原始FCS数据：原始FCS数据.zip 下载FlowJo分析数据：www.flowjochina.com; 个人分类: FlowJo使用|22384 次阅读|3 个评论

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