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RFFIT适用于测定灭活狂犬病疫苗的效价（3）结果: 热度 2 yanjx45 2012-10-23 22:02; 3. 结果 3.1. 　免疫反应的测定为了了解该免疫反应的特性，将“第五批狂犬病疫苗 WHO 国际标准品”，按照 1 ： 4 、 1 ： 16 、 1 ： 80 、 1 ： 400 稀释，免疫小鼠，每组 10 只。免疫后第 11 天、 14 天、 17 天、 21 天采集血液，用 RFFIT 检测抗狂犬病毒中和抗体。大部分结果显示，在狂犬病毒中和抗体的效价在免疫后的第 14 天达到最大值（表 1 ）。所有数据表明， 1 ： 4 稀释的标准疫苗，产生的抗狂犬病中和抗体效价最高。相反， 1 ： 400 稀释的标准疫苗，产生的抗狂犬病中和抗体效价最低。 3.2. 　比较标准疫苗在小鼠攻毒试验和血清学检测中的结果为了比较两种效价检测方法的结果，用小鼠攻毒试验和血清学试验，平行地检测不同稀释度的 WHO 第 5 批和 BRP 第 4 批标准品。该实验结果来自 8 个独立子试验共 1032 只小鼠。图 1A 显示的为 WHO 第 5 批标准品的试验结果，图 1B 显示的为 BRP 第批标准品的试验结果。图 1B 小鼠攻毒试验检测方法中，小鼠存活率的曲线表现出很大的波动。相反地，表 1A 和表 1B 中抗狂犬病毒抗体效价平均值则表现出很好的量 - 效关系。然而，组内免疫相同稀释度疫苗的小鼠抗狂犬病毒中和抗体效价则表现出很大的波动（数据没有显示）。甚至出现无法检测到抗狂犬病毒中和抗体的动物。为了测定两种检测方法之间的相关性，用血清学检测 WHO 第 5 批和 BRP 第 4 批标准品免疫后中和抗体平均效价与小鼠攻毒试验中小鼠存活率之间有曲线关系（图 2 ）。 Pearson 积差相关系数 0.82 ，提示两种检测系统的结果之间具有很好的相关性。 3.3. 　比较不同待检疫苗在小鼠攻毒试验和血清学检测中的结果来自 6 个不同的生产商的 14 种兽用狂犬病疫苗在两个检测系统中平行检测。图 3 显示在小鼠攻毒试验中检测阴性的疫苗在血清学检测中同样不能达到检测标准。同理，在小鼠攻毒试验中检测阳性的疫苗也能在血清学检测中达到的标准。两种检测方法的结果（尽管在本研究中涉及到不同的疫苗）相关系数为 0.83 。 3.4. 　接种途径对抗体效价的影响使用包括 WHO 第 5 批和 BRP 第 4 批标准品在内的 6 种不同的狂犬病疫苗检测不同的免疫途径对狂犬病毒中和抗体效价的影响。每种疫苗平行地注射 2 组小鼠：第 1 组小鼠腹腔注射，第 2 组小鼠肌肉或者皮下注射。免疫后第 14 天， RFFIT 检测每组小鼠的平均中和抗体效价（图 4 ）。数据显示，尽管组内小鼠中和抗体效价差异很大（数据未显示），不同免疫途径小鼠中和抗体平均效价差异显著。皮下注射组小鼠产生的中和抗体效价最低（ P0.0001 同腹腔注射组相比）。肌肉注射不同疫苗后检测中和抗体效价，明显高于皮下注射组（ P0.0001 ），但是仍然低于腹腔注射组（ P=0.0309 ） . 图 4 中所有的标记符号都明显的位于二分线以下。 3.5. 　 RFFIT 的改良为了使大样本检测更加简便、高效，我们用微量滴定板替代细胞培养板以及调整样品和缓冲液的用量，从而改良 RFFIT 。而且，我们以往的试验数据（数据未显示）表明长时间的孵育有助于实验结果的一致性，因此加入细胞后的孵育时间由 24h 延长到 48h 。图 5 显示欧洲药典中改良 RFFIT 和标准 RFFIT 方法检测结果的对照研究。分析这两种方法结果的相关性，相关系数 0.988 。; 个人分类: 狂犬病防治|6438 次阅读|3 个评论

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