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细胞的鬼火-解决篇: 热度 4 小水獭 2015-5-24 12:57; 这个月初我在做电生理记录HEK 细胞的时候，我在想为什么有些死细胞的荧光那么亮。一开始我误以为是死细胞的自发荧光，我还觉得这是个非常有趣的现象，幸好有王皓，张磊，吴距，周小明等朋友陪我一起思考，尤其要感谢zuobuli 。在zuobuli 的坚持下，我按照他的建议作了对照试验，如下图。我一共做了三个条件：（1） HEK 不转染任何质粒（2） HEK 转染GFP （green fluorescent protein 绿色荧光蛋白）（3） HEK 转染ChR2-GFP 融合蛋白（channelrhodopsin-GFP fusionprotein ）这里我要说明，zuobuli 还建议我做HEK 添加转染试剂但不加质粒的对照，因为我观察了（1 ）之后，发现没有转染的细胞完全没有荧光，我就没有做这个对照。实验结果如图所示：A 、B 图为条件（3 ）HEK 转染ChR2-GFP 融合蛋白（channelrhodopsin-GFP fusionprotein ）。C 、D 、E 和F 为条件（2 ）HEK 转染GFP （green fluorescent protein 绿色荧光蛋白）。从图中看出，两个条件下，都有不发荧光的死细胞（图中白色箭头所示 T ）。因此，我推翻了我之前的假设，并确认在我的实验条件下死细胞没有自发荧光。而条件（3 ）中，如图A ，B 所示的很多的发绿色荧光的死细胞，是表达了ChR2-GFP 融合蛋白的。之所以死亡，一个原因是这个培养皿是在电生理记录实验后拍的照片，已经在培养箱外放了4 小时，细胞外环境已经不好了。另外，这个融合蛋白我们进行了一些点突变，因此可能表达出来后，蛋白质运输（proteintranspotation ）不是很顺利，因此积压在核周高尔基体内，对细胞也有一定毒性。现在又有了新问题，为什么这些死细胞这么亮？我猜是蛋白质表达量过高，“货物积压”所致。细胞虽然死了，但是这荧光，还真是符合我“鬼火”的比喻呢。陆绮 2015 年5 月24 日; 个人分类: 活色生香de生物科学|4526 次阅读|7 个评论

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