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狂犬病毒与抗体在体内能共存吗？(答网友)
热度 23 yanjx45 2012-3-12 11:43
为了帮助“恐狂症”患者从对狂犬病的盲目恐惧中解放出来，本博主曾提出 一个简单实用的判断标准 ： 只要在 发病前 全程接种完了疫苗，产生了抗体，体内（包括 CNS 内）就不可能再有狂犬病毒“潜伏”，就不会再发病。 ( 见去年 9 月 8 日《南方周末 》： 《谁该打狂犬病疫苗？——“狂犬病恐惧症”与疫苗滥用》 ) 这个标准也可简述为： 狂犬病毒与抗体在体内不可能共存。 这个标准与 WHO 正式文件中的下述说法是一致的： 到目前为止，在中和抗体浓度达到或高于 0.5 IU/mL 的个体中，从未报告过狂犬病病例。健康个体在完成了 WHO 推荐的免疫接种程序后，抗体滴度高于这个最低值的实际上达到了 100 ％。 上述标准适用于恐狂症患者，他们当然不是真正的狂犬病患者。而 狂犬病患者如果 已经发病 ，则上述标准当然不适用。 网友 zhangziheng 2012-3-12 提出的问题可引出上述标准不适用的 发病后 的两种具体情况： 严教授：国际上一些研究报告显示，在一些狂犬病患者去世后进行医学尸检，曾有些患者的大脑和脊髓处没有狂犬病毒，反而有抗体出现；还有一些注射过疫苗的发病去世患者，体内同时存在病毒和抗体；不知道这种情况是真实的吗？为何病毒和抗体可以同时存在于体内？谢谢。 博主回复 (2012-3-12) ：你说的情况是存在的。但仅会出现在 发病后 ，出现在 发病后 的以下两种具体情况下： 1. 未接种疫苗，在 发病后 临近死亡时可能出现这种情况。 狂犬病毒与其他许多病毒不同的一个突出特点就是： 狂犬病毒是高度嗜神经组织的， 自然感染的狂犬病毒在进入体内后，并不进入血液系统，只是在肌肉和外周神经细胞中非常缓慢地复制，并 逆向沿轴突向背根神经节缓慢移动。 在进入 CNS 之前，狂犬病毒不会 “ 惊动 ” 免疫系统，基本上不 诱导免疫应答， 从而能避免自身被识别和清除。但在进入 CNS 后， 病毒复制会爆炸性增加 ， 引发脑炎症状 。 到发病的后期，血脑屏障被破坏，大量病毒进入血液系统，可快速激发免疫系统产生抗体。 在大部分人类狂犬病病例中，直到 发病后 的若干天，才可能检测到抗体。 CNS 内的抗体水平与在 CNS 内病毒产量的峰值有关。 不同病人 抗体滴度差别很大，有的低至接近于 0 ，有的可能高达 1000 IU/ml 以上。不过此时抗体虽然可部分地进入 CNS ，但因受血脑屏障的限制，作用迟缓，造成体内病毒与抗体共存的状态。如果有足够的时间，最终抗体可彻底清除全身所有的病毒。但由于此时大脑功能已不可逆地受损，死亡仍不可避免。通常在病毒被清除完之前，病人已经死亡。 2. 在暴露后接种疫苗太晚的情况下，在 发病后 可能出现这种状况。 病毒在疫苗诱导抗体产生之前已提前进入 CNS ，并开始大量繁殖 ( 表现为已经发病 ) 。由于抗体产生的时间较晚，此时抗体受血脑屏障的部分限制，无法在很短时间内快速彻底清除 CNS 中的病毒，结果也会出现病毒和抗体共存的情况。虽然病毒最终可能被清除，但大脑损伤无法避免，所以其结局也必然是死亡。 只要 在发病 ( 大脑受损 ) 前 打完了疫苗，或测到了抗体，就不可能出现上述病毒抗原与抗体共存的情况。
个人分类: 狂犬病防治|37921 次阅读|56 个评论
恐狂症患者：不要怀疑狂犬病疫苗的效力
热度 73 yanjx45 2012-2-28 12:08
本博主今天发布的前一篇博文，是全文翻译的《 WHO( 世界卫生组织 ) 关于狂犬病疫苗意见书 ( 2010 年 8 月 6 日 ) 》补充附件之一，原标题是《 对科学证据 ( 质量 ) 的评级 (Grading of scientific evidence) 》，现根据内容改译为《 可证明狂犬病疫苗有效的科学证据 》。 该文的 结论 是： 大量科学证据表明，经细胞培养获得的狂犬病疫苗在根据 WHO 的建议经肌肉或皮内免疫接种后，对狂犬病的预防是有效的，并且 / 或可以诱导产生抗狂犬病毒的抗体。 该文的 核心内容 是： 到目前为止，在中和抗体浓度达到或高于 0.5 IU/mL 的个体中，从未报告过狂犬病病例 。 健康个体在完成了 WHO 推荐的免疫接种程序后，抗体滴度高于这个最低值的实际上达到了 100 ％。 本博主去年 9 月 8 日曾在《南方周末 》 上发表一篇科普文章：《谁该打狂犬病疫苗？——“狂犬病恐惧症”与疫苗滥用》。 该文对“恐狂症”进行了定义； 为了有助于将“恐狂症”患者从对狂犬病的盲目恐惧中解放出来，该文提出了一个 简单实用的判断标准 ： 只要在发病前全程接种完了疫苗，产生了抗体，体内（包括 CNS 内）就不可能再有狂犬病毒“潜伏”，就不会再发病。 WHO 上述 核心内容 的表述，与这个 简单实用的判断标准 的内容在本质上是完全一致的。 现将 《南方周末 》 上发表的科普文章中直接相关的内容转述如下： 恐狂症的最常见表现就是滥用狂犬病疫苗，在明显不该接种疫苗的情况下也接种，甚至反复多次接种后仍然忧心忡忡。 狂犬病的防治是一个在医学上早已基本解决的问题，狂犬病在全球所有发达国家和部分发展中国家都已得到有效控制，每年狂犬病的死亡人数多年保持为 0 或接近于 0 。狂犬病 100% 可预防：无论是多么严重的暴露，只要按 WHO 认定的方案进行处治，可 100% 避免发病。 实际上疫苗接种失败多数都出现在第一针开始后的 20 天之内，主要是头面部被严重咬伤的患者。如果过了这个时间还未发病，以后再发病的可能性几乎不存在。 总之， 只要在发病前全程接种完了疫苗，产生了抗体，体内（包括 CNS 内）就不可能再有狂犬病毒“潜伏”，就不会再发病。 检索国内外的相关文献资料，基本未发现与此标准相违背的病例。
个人分类: 狂犬病防治|205601 次阅读|158 个评论
经典的荧光抗体技术基本原理
liuhuiying945 2012-2-17 19:55
1. 直接法 直接法是荧光抗体技术最简单、最基本的方法。它通过标记抗体直接与相应抗原（待检抗原标本）结合，来鉴定未知抗原。 其优点为： ①由于在反应中只有两种因子参与，结果判断较简单； ②特异性强，与其他抗原交叉染色较少； ③操作步骤少，方法简便、省时。 其缺点有； ①敏感性较差； ②一种标记抗体只能鉴定一种抗原； ③不能用于鉴定未知抗体。 2. 间接法 间接法是目前最常用的方法。首先用已知未标记的抗体（第一抗体）与待检抗原反应或用未知抗体与已知抗原反应，反应一定时间后，洗去未结合的抗体，再与标记的抗免疫球蛋白抗体（二抗）反应。在第一步反应中，若抗原抗体发生了反应，则抗体被固定在标本上，那么第二步反应中标记的抗体（二抗）必然与第一步反应形成的抗原抗体复合物中的抗体发生反应，这样就可以通过二抗的示踪，对标本中未知抗原或抗体进行鉴定。 其优点为； ①敏感性较高，是直接法的5-10倍； ②用一种标记的抗体，就能与一种以上的相应的抗体或抗原配合鉴定多种未知的抗原或抗体； ③既能鉴定未知抗原，又能鉴定未知抗体。 其缺点有 ①在反应中有多种因子参与，容易产生非特异性染色，结果判断有时较困难； ②操作步骤多，费时。 3. 双标记法 双标记法是用两种荧光素（常用FITC和PE）分别标记特异性不同的抗体，用于检测同一标本中的不同抗原。此法常用于细胞表面抗原和受体的研究。 用于流式细胞 仪检测的常用荧光素有FITC、TRITC、Cy3、Cy5，PE和PI，在以上各种荧光染料中，PE荧光最强，适用于弱表达抗原；FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广。 1．直接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（浓度约1×10 6 个/ml），直接加入荧光素标记抗体进行免疫反应（如做双重标记或多重标记染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入）。4℃孵育15～30分钟后，用1/15mol/LPBS（pH 7.2～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。 本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直接荧光抗体标记试剂成本较高。但减少了间接标记法中较强的非特异荧光干扰，因此更适用于临床标本的检测。 2．间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（浓度约5×10 6 个/ml），加入特异性第一抗体，4℃孵育15～30分钟，待反应完全后用磷酸缓冲液洗去未结合抗体，吸尽残留液体，再加入荧光标记第二抗体，4~C孵育30分钟，生成抗原―抗体―抗抗体复合物，洗涤后即可上机检测。注意：在整个荧光标记过程中均需参考免疫荧光细胞化学间接法染色程序，尤其是加入一抗前需使用正常非免疫血清封闭，以减少非特异性反应。如果对于未经固定的细胞需使用0.3%TritonX-100为细胞膜打孔，以保证抗体能够进入细胞内。 此法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研样品检测。但是，由于非特异性荧光背景较强， 影响实验结果，在样品制备时应加人阴性或阳性对照。另外，由于间接法步骤较多，尤其是经过多次洗涤，均可使细胞数量骤减，因此，在加入第一抗体前细胞悬液的细胞浓度约5×10 6 个/ml，上机检测前不少于1×10 6 个/ml即可，此法不适用测定细胞数较少的样品。 3．荧光标记中的注意事项 ① 为减少非特异性干扰，荧光标记物用前应用0．22um滤膜过滤或高速离心5分钟，以除去颗粒或沉渣。 ② 细胞样品的制备、染色及保存均应该尽量保持新鲜，防止分解代谢引起的表面抗原消失及细胞死亡，可以通过加入营养培养基或低浓度血清以及4~0或冰浴中操作来解决。 ③ 细胞稀少或低比例细胞亚群分析时，为保证准确，应排除死细胞。 ④ 荧光标记抗体浓度应该合适，如果浓度过高，会使非特异性结合增加。在使用一抗之前，将样品与过量的牛血清白蛋白(BSA)或来源于同一种属的正常血清一起孵育，以阻断一抗和细胞表面或胞内结构非特异性作用。在使用一抗之后，将样品、与二抗相同种属的5%～10%正常血清和二抗一起孵育，以减少二抗与一抗、细胞表面或胞内结构之间的非特异相互作用。如果使用含有与一抗或二抗种属相同的血清液体稀释抗体，便可以省略此步骤。
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世界著名抗体生产厂家介绍！
热度 2 lizhen6968 2012-2-16 14:01
世界知名抗体生产厂家简介 Santa 公司 是世界上最大的 抗体 生产厂家，目前可提供的抗体种类多达两万多种，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如 ABC 试剂盒，各种标记二抗， Western 试剂盒，蛋白分子量 Marker ，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。 Cell Signaling Technology(CST) 是最知名的和老牌的信号转导公司之一，专注于信号转导产品的提供和研究。产品具有种类多、质量好、价格低、引用文献多等优点，是您进行信号转导研究不可多得的帮手！ 其中磷酸化抗体做的尤为突出！以前 皮皮狗 也介绍过 Cell Signaling 公司的关于 磷酸化位点的网站 台 First character's position is 0. 湾 Abnova 是世界上最大的单克隆抗体生产商之一，现有抗体产品种类近 10000 种，其中 2/3 是单克隆抗体。和传统的单克隆抗体生产方法相比， Abnova 采用更先进的技术和设备，可以极大地提高单克隆抗体的生产效率并降低其生产的成本。 Abnova 具有每个月开发 500 个小鼠单克隆抗体的能力，他们的目标是：人类基因组中的每一个表达基因都至少有一种抗体。 美国 ABGENT 公司 是目前全球最大的多克隆抗体生产商之一，目前在中国苏州工业园区和上海已分别设立子公司，其产品研发生产平台已通过 ISO9001-2008 质量管理体系 SGS 认证，具有每月开发近 500 个兔多克隆抗体的生产能力。 ABGENT 公司创办开始就着力于开发全人类基因组相关抗体，已开发并推出近 20000 个抗体产品，覆盖细胞凋亡、细胞自噬、细胞功能、免疫系统、神经科学、核信号、蛋白修饰、干细胞以及特异性修饰等几乎所有的蛋白质组学研究领域，已初步建立起基于全人类基因组的抗体库。 ABGENT 公司自 2003 年以来多次被世界顶级科学杂志 “ Nature ” 、 “ The Scientist ” 等评为蛋白质组学和抗体亲和试剂供应商 10-50 强。在国际权威刊物上发表的生物医药研究论文中，使用 ABGENT 公司产品进行研究并得到成果的论文引用频率已位于全球抗体研发生产公司的前列。 RD 公司 于 1976 年成立于美国，一直致力于各种细胞因子及其相关分子的生产研发，其生产的各种 ELISA 试剂盒、重组因子及抗体以其卓越的品质赢得了世界各国科研及临床诊断机构的青睐。 是全世界最大的细胞因子公司。该公司产品丰富涵盖了百余种细胞因子类 ELISA 试剂盒 , 重组细胞因子类蛋白（ 209 种之多）及相关的多达 250 余种单克隆、多克隆抗体；细胞凋亡、 Caspase 及胶原酶系列以及细胞因子类等热点领域。 享誉全球的生命科学试剂研发和经销大公司 , 目前被 Millipore 公司 收购，其产品涉及到神经生物学、细胞外基质、信号传导和传染病研究。公司拥有强大的研发背景，是许多生化试剂技术如 ESGRO 、 LIF 专利的拥有者和独家生产者，公司拥有严格的质量控制体系和十分完善的售后服务体系，在客户中树立了良好的信誉。 MBL , 成立于 1969 年，是日本第一家抗体生产商。公司早期致力于研究生产血浆蛋白质抗体 , 是抗体研究、发展和生产的先锋者。现在，公司提供 3000 多种细胞骨架、致癌基因产品和信号转导蛋白质抗体。 1975 年， MBL 成为日本首家血浆蛋白质的诊断剂的生产商，之后，公司就致力于开发、生产免疫诊断试剂，特别是自身免疫性疾病方面的诊断试剂。公司的研发能力在该领域中得到了极高的评价。 MBL 的自身免疫性疾病的诊断剂对医药界贡献非常大，该公司产品在自身免疫性疾病方面占据了日本国内市场 80 ％的份额，在海外市场也同样受到欢迎。近年来， MBL 大力引进重组 DNA 细胞和细胞融合技术来开发用于疾病诊断和疗效观察的诊断试剂。另外，公司开发了大量分子生物学和细胞生物学研究的产品，包括抗体和可溶性 Fas ELISA 试剂盒。 Novus 位于美国科罗拉多州 , 是一家著名的抗体公司。公司的愿景是提供优质的产品 , 完善的客户服务以帮助客户快速找到最适合的抗体产品。通过全球代理商和网络提供 10000 多种研究级抗体 , 涉及生命科学的各个领域。 BD 产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学和蛋白质组学等诸多领域，旗下拥有 Clontech 、 Discovery labware 、 Pharmingen 、 Falcon 等质品牌，值得称赞的是每一个品牌在其所在的领域都是其中的佼佼者。 PeproTech 位于英国 , 在美国也有公司。成立 12 年来 , 公司已开发了 200 种以上的重组细胞因子和相关抗体 . 所有产品以冻干形式提供 , 以方便运输和储存 . 目前公司正在扩大产品线 , 生产抗原亲和多抗及其生物素标记物 ,ELISA 试剂盒和新型抗体。主要以小包装的细胞因子受广大研究生客户喜爱。 Merck 是生命科学领域的旗舰企业，拥有以下品牌： Calbiochem corp. 为全球最大的信号转导类产品供应商。 B iodesign 美国主要的工业及研究用免疫学产品供应商，公司符合 ISO 9001 ， FDA ， GMP 等多项认证，获得 USDA 许可，其产品超过 4500 种，在全球有 40 多个分销商，为生命科学研究，药物制造，生物技术及诊断产品开发及生产等多个领域提供抗体、抗原、免疫检测全套免疫学产品。 Pierce 公司 是蛋白质化学、免疫学和层析等很多方面的先驱和领导者，主要产品包括：化学发光体和比色底物、分析试剂、荧光标记探针、酶联免疫分析试剂盒等。皮皮狗已经多次介绍过了！超喜欢他们的宣传词： “ All is Possible, with Right Tools…… ” Cayman 向世界科学工作者提供多研究领域的生化和免疫试剂。包括：肿瘤、氧化氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等等。他们有用于检测的特色试剂盒，如：类花生酸类物质、游离的生物标志、环核苷、激素及氧化氮等。另外， Cayman 提供多种高质量试剂，包括：类花生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体。 德国美天旎公司是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。主要开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、 DC 细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势。 CD133 、 BDCA-2 （ CD303 ）、 BDCA-4 （ CD304 ）单抗均为其专利产品。 Assay Designs 位于美国的密歇根州，成立于 1992 年，为全世界生化、医药专业的科研工作者提供优质、快速、方便的产品， " 使您的科研更为简单 " 。公司目前可提供检测和定量细胞调节、信号转导、炎症、氧化过程和凋亡相关的分子。公司最近开发了 CORRELATE 和 TITERZYME 免疫试剂盒，活性检测试剂盒、 FLASHLIGHT and BIOLIGHT 发光混合物、抗体等。 Assay Designs 提供各种 eicosanoid 试剂盒、人和小鼠的细胞因子试剂盒以及世界唯一的非放射性 COX 活性检测试剂盒，其精确和重复性无与伦比。另外，公司大量提供抗原和抗体相关产品。 Dynal Biotech ASA. ，成立于 1986 年，是一家在德国、法国、英国、美国、中国及澳大利亚均设有分公司的跨国公司，总部位于挪威奥斯陆。总公司一直致力于磁性分离技术和 HLA 相关产品的研究、生产和销售。经过多年发展，其产品线已覆盖了免疫学、分子生物学、微生物学、 HLA 等生命科学领域。 1996 年， Dynal Biotech ASA 通过了 ISO9001 质量体系认证； 2002 年，两个系列产品取得 CE 认证； 2003 年，再次通过 ISO9001:2000 以及 ISO13485 质量体系认证。 2004 年 3 月，其产品通过了美国 FDA 认证。 2005 年 2 月， Invitrogen 公司成功收购 Dynal Biotech 公司。 Dynal 网站： www.invitrogen.com/dynal Dynal 中国网站： www.invitrogen.com.cn/dynal/ 罗氏公司（ Roche ）应用科学部致力于生命科学领域产品的开发，向用户提供优质的科研产品。在 1998 年收购德国宝灵曼（ Boehringer Mannheim ）公司后，产品涵盖了分子生物学，细胞学，免疫学，蛋白质组学，生物化学等多个研究领域，罗氏拥有 PCR 以及地高辛标记产品的全球专利，其 DIG 标记产品和细胞凋亡相关产品在业内享有极高的声誉。五十年来，罗氏应用科学部专注于生命科研领域产品的开发和推广，如今已经有超过 2000 种的科研产品在市场上销售，覆盖了生命科学研究领域的各个方面，为科研工作者提供完整的解决方案。 BioLegend 公司位于美国加州，致力于为生物医药研究的各个前沿领域提供高质量的抗体及其它相关试剂。 BioLegend 聚集了一批来自 PharMingen 公司的专业人士，建立了一支具有雄厚技术背景的专业队伍，其中该公司的 CEO 更是为 PharMingen 公司的创始人之一。通过其自身的先天优势，以及与世界知名实验室和研究所的良好合作关系，其目标是以最合理的价格为广大客户提供高质量的免疫学和细胞生物学产品。 BioLegend 公司以其专业技术力量为保证，提供各种质量卓越的产品，并不断地开发新产品，以满足飞速发展的生命科学研究的需要。 来自美国圣地亚哥的 eBioscience 公司，以其高品质的产品，良好的服务及实惠的价格赢得了多家世界顶尖实验室和科研机构的青睐。目前该公司一直致力于炎症方面的单克隆抗体的研究，在 TLR 方面有着很高的长久。 SBA （ Southern Biotechnology Associates, Inc. ）公司建于 1982 年，由美国伯明翰的阿拉巴马大学（ UAB ）的 Dr. Max Cooper 细胞免疫学实验室的科学家创建。 SBA 致力于高质量、高亲和纯化的二抗的生产、纯化和标记。同时， SBA 还提供各种亲和纯化的多克隆和单克隆抗体，其中包括：荧光素和酶标记物，低内毒素 / 不含叠氮化物（ LE/AF ）制剂， F(ab) 和 F(ab’)2 ，此外还有纯化的免疫球蛋白和胶原质。 NeoMarkers (Lab Vision NEOMARKERS) 公司在免疫组织化学产品领域上处于世界领先水平。 Lab Vision NEOMARKERS 从研究与临床需要出发，设计开发产品，真正满足实际要求，产品已被生命科学研究群体所广泛认同；有完善的专业文献资料积累，所有产品都提供详细的技术资料与重要的相关文献；产品提供多种规格，单抗有 0.1ml 和 1.0ml 与即用型（ 7ml ）以及纯化的抗体（试用型 20ug ， 100ug 与 200ug ），可以适应各种不同要求，此外还可根据实验要求选择特定的产品形式或规格。 BioVision. Inc. 位于美国加州的 Palo Alto ，是世界上首屈一指专著于凋亡和细胞信号研究的公司。其产品质优、价廉、包装使用方便。 BioVision 致力于为研究者们提供最好、最新的研究工具而不断扩大产品及服务质量。该公司提供用于检测早、中、晚期凋亡的试剂，可以检测凋亡发生的不同区域，包括：线粒体、胞浆、胞膜及胞核。 KPL 公司是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂，其产品有：亲和纯化的抗体和偶联物、 ELISA 和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。
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[转载]核酸开关
oaiwqiyao 2012-2-14 11:17
RNA酶和核酸配基，单链寡核酸链具有高级三维结构，既能够与蛋白质等特异性结合，也能够作为酶高效催化生物与化学反应。Aptamer与蛋白质结合的强度和特异性均不亚于单克隆抗体，而且SELEX 筛选技术使得Aptamer的筛选非常容易而快速，相对单克隆抗体的制备要简单得多，因此Aptamer在临床诊断及治疗方面具有广泛的应用前景。 Aptamer 适体；核酸识体；适配子 Aptamers are single-stranded oligonucleotides with a length of tens of nucleotides and single stranded DNA aptamers have a very highly ordered tertiary structure,which allows them to form stable and specific complex with different targets such as protein,nucleic acid. 可用于定量检测目标蛋白，其亲和性及专一性与单克隆抗体有一拼，且半衰期较长，不易变性，稳定性也较好。由于其属于核酸，在DNA检测方面的发展也可以运用于此。 下面介绍一下跟aptamer有关的一个比较有趣的东西，叫做Riboswitch。很多aptamer在没有ligand结合的时候是没有稳定的高级结构的，但当ligand存在时就会折叠成紧密的三级结构。于是有人把某种小分子的aptamer插在E.coli mRNA的核糖体结合位点（Ribosome binding site, RBS） 和起始密码子之间，当小分子不存在时，核糖体能顺利读过aptamer区域，翻译蛋白质；但当小分子存在时，apatmer区域紧密折叠。使得核糖体不能顺利读过，抑制了蛋白质的翻译。这是完全人工构造的翻译水平的调控模型。实际上有很多natural的riboswitch的例子，作用机理多种多样，但大多出现在5'UTR，而且都是利用小分子与mRNA上aptamer区域的相互结合改变RNA结构，从而调节翻译或转录中止。Yale的Ronald Breaker就是因为发现了这些自然的riboswitch而扬名利万，最近两年风光无限。我老板有一个rotation project，就是把ATP aptamer（可以区分ATP和ADP/AMP）构造成riboswitch，后面接上报告基因，实时反映细胞内的能荷。但好像还没人愿意做这个项目。我正在酝酿中的一个project也是利用人工riboswitch来对一些蛋白进行engineering，现在还在可行性验证阶段，呵呵。 小型RNA分子因為被發現可控制基因表現，近幾年來受到科學家們的注意。然而另一種RNA能夠偵測一些小分子的量來幫助細胞運作更為順暢，並且可以藉由細胞本身的需要來改變基因的表現與否。 耶魯大學分子學家Ronald Breaker與他的研究團隊發堀出這些具有多項能力的RNA分子--稱之為riboswitch—而這些riboswitch就是指由特定的mRNA結合住所謂的代謝分子 (metabolite)，藉由改變mRNA的形狀來啟動基因的表現與否，而這些代謝分子的產生是經由一些基因藉由感受代謝分子的量多量少來調節的。先前都假定有一個特定的蛋白質來結合住代謝分子並且啟動下游的基因的表現或抑制，而過去Breaker和其他大學的研究學者一樣花了相當大的精神與時間來找尋這個蛋白質，但卻都徒勞無功。然而有一個理由讓他們都找不到的原因就是這個神秘的蛋白質是一個真實的mRNA，而並非是一個蛋白質。 在這次的會議中，Breaker報告一個細菌的riboswitch，並且將發表在Nature上。這個riboswitch可以調節glucosamine的量 (這是一個可以幫助細菌形成細胞壁的物質) ，這個riboswitch也是一個ribozyme，可以利用切開RNA來調控基因的表現，當細胞中glucosamine的量高時，代謝分子會結合住mRNA並誘使mRNA來切斷他自己，但是奇怪的是mRNA切的位置是不會轉譯成蛋白質的區域，然而還是可以破壞基因的表現，Breaker也不知道為什麼。不過Breaker的研究是受到肯定的，而這樣的機關也可以在真菌和植物中發現，Breaker進一步計畫開始找尋動物中這樣的機關存在。
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研究方向
toryliu 2012-2-6 10:32
我主要从事抗原抗体方向的研究，主要是农残、兽药、抗生素等小分子物质的抗体研发及检测，平时实验包括抗原设计及免疫原的制备，ELISA实验（夹心法和竞争法），有时做一下胶体金试剂条。从事这方面工作时间不长，希望前辈指导。
个人分类: 未分类|2553 次阅读|0 个评论
狂犬病特异性抗体：对狂犬病抵抗力的替代检测
flyeagle0931 2011-11-2 21:55
狂犬病特异性抗体：对狂犬病抵抗力的替代检测 已有 109 次阅读 2011-11-2 10:03 | 个人分类: 狂犬病防治 | 系统分类: 论文交流 | 关键词:检测 狂犬病 抵抗力 （这是一篇专业论文的全文翻译，主要供相关专业人士参考。） 摘要 ：抗体在许多传染病的预防中起主要作用。 抗体的主要功能是中和作用，能提供针对大多数病毒的保护作用 ，此类多功能蛋白的Fc段和补体依赖活性在此过程中起着关键作用。体内针对病毒病原体的防御机制十分复杂。病毒中和作用，即经常在体外进行检测的抗体使病毒灭活的能力，是很重要的，但它在保护机制中仅起部分作用。 快速荧光灶抑制试验（RFFIT） 仍然 是用来检测狂犬病毒中和抗体的“金标准” 。 除中和作用以外，抗体与狂犬病毒特异性抗原结合的活性可通过 酶联免疫吸附试验（ELISA） 以及其他方法来检测。对于任何疾病，在选择合适的检测方法来评估抗体效价时，都需要慎重考虑检测方法的验证以及检测结果的阐释；对于像狂犬病这样的致死性疾病，这些考虑更是极端重要。狂犬病抗体的实验室一维检测方法，以及对所选择检测方法的验证，都有先天的局限性，这些都是在选择检测方法并对结果进行阐释时必须慎重考虑的，并应牢记这些检测只是保护作用的替代检测。 引言 很多情况下都需要精确测量循环抗体，如动物防治人员要确定是否需要接受狂犬病疫苗加强接种以建立一个可接受的暴露前免疫状态，内科医生考虑引发某个儿童的脑炎的病因，有免疫缺陷的狗的主人担心狗在接种疫苗后的反应无法通过血清学检测，因而使他们不能前往已消灭狂犬病的地区，研究者试图确定某个浣熊群体对狂犬病疫苗诱饵是否产生了足够的反应，或者有人需要确定狂犬病免疫球蛋白(RIG)产品的效价。在上述每一种情况下，测定或单纯检测到狂犬病毒特异性中和抗体或其他抗体将有助于解决相应的问题。然而，正如上文提到的几种场合具体的情况各不相同，所选用的检测方法的特性、对检测方法的法规要求，以及在每种场合检测的目的均各不相同。体液免疫应答系统针对狂犬病毒抗原而产生抗体，这个过程由许多因素控制，包括抗原数量、接种途径、 主要组织相容性复合体（MHC） 基因的表达和介入，除此之外还有个人的健康状况等。对宿主免疫应答的认识，包括 免疫球蛋白（Ig） 亚类（型）、应答的动力学和持久性，都是对狂犬病免疫力进行量度或分级所必需的。 最初，检测 狂犬病中和抗体（RVNA） 是用 小鼠中和试验（MNT） 方法在体内进行。后来，快速荧光灶抑制试验（RFFIT）作为体外检测的“金标准”而建立。狂犬病免疫力的检测方法多种多样，涉及体液成分的测量（即Ig亚类或功能活性）和操作特性（即特异性或敏感性），以及该方法的成本和复杂性。在选择和正确使用这些方法，以及解释从这些检测方法所得到的结果时，理解上述每一种独特因素是十分必要的。此外，各种法规（例如，来自 美国食品及药物管理局（USFDA） 、欧盟、世界动物卫生组织）都要求，用于检测狂犬病毒抗体产生的实验方法必须经过验证和批准，此要求适用于宠物运输和人用及兽用狂犬病生物制品的生产和评估。在本文中，我们将讨论以下问题：（1）狂犬病特异性抗体在疾病预防中的作用，（2）可用于检测和量度的方法，（3）对方法标准化和验证的考虑和现行的要求。 （一）方法 使用美国国立医学图书馆 医学主题词（MeSH） ，对1975至2008年PubMed在线数据库进行文献检索。对选定论文和综述的参考文献列表也逐个进行了搜寻。此外，堪萨斯州立大学狂犬病实验室获得的未发表的狂犬病血清学数据也包含在本综述中。 1. 狂犬病特异性抗体在疾病预防中的作用 抵御狂犬病毒的动物模型已经证明了RVNA的重要作用 。事实上， 在实验中单靠RVNA即可导致感染小鼠的 中枢神经系统（CNS） 中的病毒被清除 。 尽管有些抗体可能会特异性识别病毒N蛋白，但大多数狂犬病毒特异性抗体都是针对狂犬病毒G蛋白的抗原表位 。狂犬病毒特异性抗体通过哪些特异性抗原表位或免疫球蛋白(Ig)亚类来中和病毒的机制并未完全弄清 。单个的狂犬病毒颗粒可以结合多达1000个抗G蛋白的单克隆抗体分子而不被中和，这表明病毒中和作用可能不仅仅只涉及抗体结合病毒颗粒的表位这一过程 。可以假定，与那些在体外实验中不能中和病毒的抗体相比，在体外实验中能中和病毒的抗体在体内能更高效地产生针对病毒感染的保护作用。抗体的Fc段单独具有特殊的生物学功能，包括激活抗原提呈细胞和补体级联反应。因此，人们预期整个IgG分子比中和抗体的表位特异性的F（ab） 2 片断更有效 。随着分子生物学技术的发展，欲通过基因工程手段获得特异性的抗体Fab片段和完整的单克隆抗体用于诊断和治疗，了解抗体如何中和狂犬病毒的机制就显得更加重要。由于在实践中仅仅依靠检测抗体亲和力很难预测多克隆或单克隆抗体中和病毒的能力，中和活性只能首先通过某些体外检测方法确定，哪怕这样做仅能提供体内活性的估计值。这就是说，某一狂犬病特异性抗体制品在体外表现出强有力的中和作用，也有可能在体内起不到保护作用 。 狂犬病毒是高度嗜神经组织的。在 中枢神经系统（CNS） 中，在病毒感染进入终末阶段之前，病毒在绝大部分时间内不被宿主的适应性免疫应答系统发现。 除在此 免疫特权位点(immune privileged site) 内引发感染之外，狂犬病毒能抑制宿主产生本来应当被激发的任何免疫应答，因此感染的最终结果几乎是100%的死亡。相反， 狂犬病疫苗能刺激产生高水平的循环RVNA。 这就是为什么未接种过疫苗的个体暴露于狂犬病毒后，首先需要及时清洗伤口，以减少在暴露部位的病毒载量，并在狂犬病疫苗系列接种前接种狂犬病特异性免疫球蛋白（Ig）， 这样对防止感染事实上是100％有效。 狂犬病免疫球蛋白（RIG） 的被动保护作用也是至关重要的，它能立即中和大多数感染性的病毒颗粒，从而在等待宿主的适应性免疫应答产生之前阻止病毒的扩散。 一贯使用的狂犬病疫苗均为灭活全病毒疫苗，这种疫苗能促进抗狂犬病毒特异性抗体增长，伴随有CD4+ T淋巴细胞应答，其中包括细胞因子的产生。每个个体因接种狂犬病疫苗而产生的多克隆抗体是针对狂犬病毒抗原特异性的独特的组合。虽然大多数个体在暴露前或暴露后接种可以产生多种可测量的抗体，但所产生的RNVA在中和活性和数量方面可能仍有很大差别。 抗体升高是由于宿主内在的反应和针对外来因素的反应，外来因素包括给予的抗原数量、抗原类型、暴露或疫苗接种的途径等。例如，已证实越有效的疫苗在人体内诱导的RVNA水平越高 。其他研究已经表明，疫苗的类型和接种的途径能影响疫苗接种后14天到一年的抗体水平 。另外，针对灭活疫苗的 2型辅助T细胞（Th2细胞） 的免疫应答与接种活病毒疫苗后 1型辅助T细胞的（Th1） 的激活截然不同。除诸如年龄和健康状况等宿主因素外，个体的适应性免疫应答还需要抗原提呈细胞上的MHC分子结合外源多肽形成特殊的MHC-多肽复合物，并刺激相关的T细胞克隆增殖。由数百个等位基因组成的MHC复合物的基因的多样性，会影响疫苗接种后的免疫应答的多样性 。体液（Th2）和细胞（Th1）型的免疫应答主要是被细胞因子的生产所调控，包括抗体应答的成熟和Ig亚类的产生。已经观察到人体狂犬疫苗接种后的两种反应——高或好的应答，以及低或差的应答 。关于RVNA反应的持续时间长短，可基于疫苗接种后应答最高值的水平和变化趋势来进行预测。 2. 检测和量度狂犬病毒抗体的方法 检测和量度狂犬病毒特异性抗体的可行办法有抗原结合试验或病毒中和实验。 在抗原结合试验中，血清或 脑脊液（CSF） 中的抗体根据其结合各种狂犬病毒抗原，如全病毒、纯化亚基或者模拟表位的特殊肽段的能力来进行检测、定量和鉴定。这些检测可以确定抗体的亲和力、活性和抗体结合的特异性。一般来说，这些方法包括将抗原固定在支持物的表面，如小管、平板或小珠。然后抗体和抗原之间相互作用，通过各种可视化和定量化的显色检测系统获得结果，涉及到酶底物反应，或将荧光或金黄色葡萄球菌蛋白A / G标记的第二抗体（二抗）结合到已与抗原结合的第一抗体（一抗）的反应。这些检测可以用来测定针对病毒内部蛋白（如结构蛋白或者酶活性蛋白）的抗体，也可以用于评估与病毒外部蛋白相结合的中和抗体的水平。与此相反，现代病毒中和实验都是基于细胞的检测方法，检测血清或CSF中针对活病毒的抗体的功能活性。在细胞培养（体外试验）中，病毒中和作用的机制取决于病毒颗粒的表位和抗体的互补位点（特异性中和位点）的相互作用，也可能受实验中细胞表面受体特性的影响 。有证据表明，狂犬病毒感染神经元细胞，须利用烟碱乙酰胆碱受体、低亲和力神经生长因子受体、或神经细胞粘附分子，而感染非CNS细胞则是通过其他尚未鉴定的受体 。病毒中和试验的结果是基于对细胞培养中病毒生长情况的测定，以此来确定病毒是否能逃逸中和作用。另一方面，同中和试验相比，结合试验检测的是狂犬病毒特异性Ig应答的另一套特性。因此，结合实验的结果显然不能直接同中和试验结果相比较 。通过适当的验证程序并考虑检测目的的需要，结合实验可用于确定抗原特异性抗体是否存在，在某些例子中可确定Ig亚类，这些结果可用作中和抗体反应的近似值或再次确证。检测的目的将决定哪些方法是最合适的。例如，检测在脑脊液中的特异性狂犬病毒抗体是诊断狂犬病毒感染的方法，无论是进行结合试验（如在玻片上固定全病毒来检测IgG或IgM的抗体种类）或是中和试验（如RFFIT）。 在血清中检测到抗体活性，就标志着早先曾 接种过疫苗；如果已出现狂犬病临床症状，则标志着已被感染；而在极罕见的病例中，则标志着早先曾暴露于狂犬病毒但并未出现临床症状 。 为了全面确定狂犬病免疫力，需要高度特异的分析，并且需要有发现非常低水平抗体的能力，这些抗体通常是特异性的 IgM和IgG等亚类。通过使用特异性的纯化抗原和更为可靠的检测（读数）系统，结合实验较容易设计用来达到上述要求。不过， 对狂犬病感染的保护作用进行检测的最佳方法是病毒中和试验。 由于实验性病毒攻击方法不可能在人体进行，因此使用基于现场观察的实验动物保护作用模型作为替代，血清中和抗体的数量和持续时间的检测则采用体外方法。 通过改变检测方法涉及的各种成分，如所用的病毒株、检测系统等，能够分别设计出“符合目的”的检测。例如，对蝙蝠的某个特殊种群中的某个狂犬病毒变种的RVNA进行检测，可在体外进行“特异性”检测，采用推测在这些蝙蝠中流行的狂犬病毒变种作为攻击病毒。测试方法的灵敏度可通过改变抗原数量或攻击病毒的剂量来调整，从而精确确定低水平的抗体、非特异性抗体或交叉反应抗体或物质的存在。对于结合实验，如ELISA，一个标记的抗IgM的二抗只检测一抗为IgM类的狂犬病毒抗体。在相同实验中同一样品的抗IgM水平可与抗IgG水平进行比较，但需用标记的抗IgG二抗。竞争ELISA法采用了一种针对一个狂犬病毒表位的竞争性单克隆抗体，来检测实验样品（血清或脑脊髓液）中的抗体与此单克隆抗体竞争结合到同一表位的能力 。这使得该检测方法可高度特异地检测能与所给定的狂犬病毒蛋白的特异性表位结合的抗体 。 此外，对该实验方法稍作变通可使之在不同环境和实验室中都更易进行和标准化。例如，分子生物学技术利用假型病毒为载体，如慢病毒载体系统，来表达狂犬病糖蛋白，具有多种优点。它们提供了以下能力（a）标准化目标表位;（b）可检测不同株系或基因型病毒的中和作用;（c）使用低生物危险的实验方法（即比使用活的狂犬病毒更为安全的方法）和（d）使检测方法更经济 。在选择“符合目的''的方法时，这些因素都是要考虑的。 测定的 临界值（cut-off value ，即表明血清已转化或能确定已进行适当疫苗接种的位点）对于每种实验方法都是特定的，而且对于结果的解释十分关键。在一般情况下，1:100的血清中和滴度（90％终端滴度）被认为是有效的，即使在组织中抗体的实际水平可能更低 。 抗体滴度临界值0.5 IU（国际单位）/mL是全球公认的 ，最早是在1992年的世界卫生组织（WHO）狂犬病专家委员会的第八次报告中提到。关于暴露前疫苗接种，报告中声明：“进行活的狂犬病毒诊断、研究或疫苗生产的实验室工作人员都应该检测血清样本中的狂犬病毒中和抗体，当滴度降到低于0.5 IU/mL时应进行加强免疫。”报告还建议使用MNT或RFFIT检测RVNA，使用 通用的攻击病毒株（CVS株） 。 显然， 0.5 IU/mL的滴度 水平 被确定为代表在人有狂犬病毒感染风险时已进行了适当的 疫苗接种（并非代表一定有保护作用！） ，而且 其结果通常是 使用标准的CVS病毒株进行血清中和实验而得出的。 美国 免疫咨询委员会（ ACIP ） 建议， “对于有连续或频繁地暴露于狂犬病毒风险的人， 如果 1:5稀释的血清 滴度低于抗体最低 可接受的完全中和作用水平，推荐接种一剂疫苗作为暴露前加强免疫”（ 最低可接受的抗体水平未能以 IU / mL为单位确定 ），并建议 使用RFFIT 方法 来 检测 。因此，当 用 其他方法来测量人类 的 狂犬病特异性抗体，或 用RFFIT来检测其他物种（非人类）时，0.5 IU/mL的 可接受水平可能不适用。一篇狂犬病毒攻击研究的综述建议，RFFIT结果的有效 临界值 对于猫和狗来说分别是 0.1和0.2 IU/mL 。RFFIT或FAVN方法测定的0.5 IU/ mL的水平，是被大多数无狂犬病地区的权威机构认可的进口猫或狗接种疫苗后有适当应答水平的证据 。当对比用RFFIT和市售兽用ELISA试剂盒来检测浣熊血清的结果时，使用不同的临界值才能得到类似的灵敏性和特异性 （见表 1 ）。对于浣熊血清的 RFFIT检测 ，设定 临界值为0.5 IU/mL能适应在 野生动物的血清 中可能存在非特异性抑制剂的情况 ； 如果临界值设定得太低的话， 则可能 会得出 假阳性的结果。通常， ELISA 法不容易受到 其他物质的 干扰， 这是 因为在该法 中使用的 血清稀释 度 一般较高。 通过 使用这种特殊的测试 试剂盒，对于这组样品，0.1EU （当量单位） /mL以上的测量值才可能具有特异性 。在浣熊食饵防治项目中监测其 摄入诱饵时，与确定对个别浣熊的保护程度相比，更重要的是采用某种方法能估计群体的潜在免疫水平。在研究中，对用相同检测方法获得的结果进行比较时，使用不同的临界值会得到误导性的结论。因此，可区分接种过疫苗和未接种过疫苗的浣熊的检测方法和临界值就是最好的“符合目的”的方法。 同样 地 ，在一项 关于人接种狂犬疫苗后的反应的研究中，使用血清转化的临界值0.5 IU/mL来比较三种ELISA方法与RFFIT方法，结果也显示下限 水平 具有 重大 意义 。用RFFIT结果进行计算和判断血清是否阳转时，都将依赖所用的临界值，无论临界值是用0.5 IU/mL，还是用ACIP接受的在1：5稀释时能完全中和的水平。例如，在比较ELISA和RFFIT检测的敏感性和特异性时，判断血清转化是阴性还是阳性，如果采用ACIP水平而不是0.5IU/mL的水平，会得出不同的结果 。在这两个例子中，适当的临界值的确定应具体针对每一种方法，并考虑实验的目的和法规的要求。除对特定方法设置适当的临界值，监管机构，如欧洲药典、美国FDA、或在无狂犬病疫区的国家进口部门，可能还需要通过实验室的确认、批准或授权。 3. 方法的标准化和验证 为了能对接种过疫苗或暴露于病毒的个体的抗体特征和效价提供有意义的比较，狂犬病血清学检测方法的标准化十分必要。当需要在不同实验室和不同时间对狂犬病血清学研究结果进行比较时，标准化更有特别重要的意义。发展 荧光抗体病毒中和（FAVN）检测 的部分原因就是为了对使用中的RFFIT的不同变动进行标准化 。测试中的各种变量，包括攻击病毒、抗体、靶细胞、临界值，都必须标准化，从而使实验结果具有可比性。例如，在间接ELISA检测中，如果用完整的狂犬病毒而不是狂犬病毒G蛋白作抗原，而所有其他变量都是标准化的，则结果将不具有预期的可比性。在大多数的样品测试中，被检测的大多数狂犬病毒抗体是针对G蛋白的，但针对病毒核蛋白和磷蛋白抗原的抗体也并不少见，这些抗体在以全病毒为基础的间接ELISA法中也可检测到 。在对单克隆抗体的效价测定中，重要的是要考虑特异性地针对单一表位的某种单克隆抗体，可能不足以中和攻击病毒株的所有表位（抗原）变种，特别是单个病毒样品中可能包括大量准种 。同样地，不同的攻击病毒株可能影响血清中和试验的结果。在对人类对象的一项研究中，针对与疫苗株同源或异源的攻击病毒株的血清滴度进行了体外检测和比较，结果显示，在大多数检测对象中，针对同源毒株可检测到更高的滴度 。并且，攻击病毒剂量不论是高还是低，均会影狂犬病Ig效价的检测 。通过使用一个经过验证的抗狂犬病血清对照参考标准，可使某种方法的结果标准化，能将不同检测结果（如滴度、OD值等）转换成诸如 IU/mL 或 EU/mL 这样的通用单位。 RIG产品目前使用的国际参考标准品，包括 世卫组织（WHO） 狂犬病免疫球蛋白（RIG）首批国际标准品，WHO RIG第二批国际标准品，和 世界动物卫生组织 (OIE) 犬类RIG参考血清标准品。 这些产品中的每一种的效价都通过血清中和试验方法被赋值 。原始的RIG参考血清国际标准品是马源的，于1955年建立。依据该 冻干制品重量为 86.6mg/ 安瓿，认定其效价为 86.6 IU 。 WHO RIG首批人源参考血清是从接种过疫苗的人的混合血清制备的。人源RIG的效价，是由六个实验室协作，以上述马RIG标准品为参照，采用RFFIT方法检测而确定。 检测包括在四次重复试验中检测制品的两种稀释度（低和高）。 经统计分析，在1984年， WHO RIG首批国际标准品的效价被确定为59 IU。 以类似的方式，1993年对接种疫苗的人的第二批合并血清进行了测试，确定其效价为30IU，并作为WHO RIG参考血清的第二批国际标准品。在美国使用的RIG参考血清，批号为R – 3，是WHO RIG参考血清首批国际标准品同一批次的一部分。 OIE犬类参考血清标准品效价为6.7IU ，该批次的制品是根据WHO RIG第二批国际标准品校准的。美国FDA于1997年对这两种WHO人源RIG参考血清的相对效价进行了比较，2006年堪萨斯州立大学狂犬实验室再次重复了该实验。这种比较表明，WHO首批国际标准品与WHO第二批国际标准品相比，其相对效价存在下降趋势，在1997年下降 2.5% ， 2006 年下降 14% 。尽管认为这些差异没有统计意义，但提示在比较狂犬病血清学结果时，使用不同参考标准品会有影响，质量控制和标准品都非常重要。 将采用血清中和试验确定的 RIG 效价数值等同于结合实验确定的数值是不合适的，可能会有问题。 图1说明，将血清中和试验确定的相同效价的多种RIG参考血清用于计算ELISA方法获得的效价，所得数值会有差异。当WHO RIG首批和第二批国际标准品分别被稀释到 2.0 IU/mL ，再用 RFFIT 方法检测，可得到相似的效价数值，但用 ELISA 检测，结果会出现差异。 因此，在WHO RIG首批国际标准品用来作为ELISA分析中标准曲线的参照时，如果改用WHO RIG第二批国际标准品，则所得数值会较低。 在试验标准化方面，一个需要考虑的额外因素是“方法到结果”的计算。例如， 50% 或 100% 终点滴定 , 这两者都能用于血清中和分析的计算，但将产生不同的滴度数值。 对于任何结果的比较，都必须知道，而且必须明确说明，采用了哪种计算方法来得到滴度数值。 （二）结论 随着对免疫机制和疾病预防研究的深入，我们对检测抗体滴度的不同方法的特点和差异性有越来越清晰的认识。 为了确定疫苗接种后狂犬病免疫是否成功建立，对狂犬病特异性抗体的体外检测是基本的，是必须采取的第一个步骤。 尽管如此，体外检测并不能与体内是否产生保护完全划等号。即便使用体外检测狂犬病毒中和活性的 “金标准”，也只能提供保护作用的估计值。尽管病毒中和试验的使用已有很长历史，但是在检测狂犬病特异性抗体、精确测定人用狂犬病生物制剂配方中的RIG效价，或评估野生动物对狂犬病口服疫苗的摄入量等方面，目前仍然没有国际公认的标准方案。方法的标准化需要仔细审查和评估实验室试验的开展情况，其中包括实验室操作审查、标准操作程序的颁布和共享，以及实验室内和实验室之间对实验操作熟练程度的评估。为了确保始终符合公认和普遍接受的标准，质量保证方案要求进行熟练性测试、培训和认证，以及检测操作的动态管理。为达到目标，与检测相关的所有机构之间必须密切合作，相关机构包括国家实验室、管理机构、商业公司、狂犬病诊断和科研实验室。 对于像狂犬病这样的致命疾病，疫苗接种和被动免疫（使用HRIG）对于暴露后的保护是绝对必要的，对在体内针对病毒的保护作用进行预测时，对每次检测的精确性和效果的验证至关重要。此外，针对每种新型预防性生物制品，无论是疫苗、免疫球蛋白或单克隆抗体制剂，一个基本要求就是确认所采用的任何中和实验系统或抗原结合检测方法适用于预测它们在体内的保护作用。只有充分理解抗体如何中和病毒的感染性，才能开发出更好的疫苗，使疫苗的免疫原能有效提呈，以诱生特异性抗体及其 同种型(isotype) ，产生最强的中和作用，最终能提供最大的保护作用。
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牛奶也有坏处
热度 1 xupeiyang 2011-10-16 09:14
你可能作梦也不会想到，女性性欲的隐藏杀手会是饮食。有关专家提示：如果你常常感到性欲低落，看医生又找不出原因，那么就要从你家的厨房下手。 　　晓梅突然发现自己对“那种事”没了兴趣。寂静的夜晚，面对情绪高潮的丈夫，晓梅除了内疚别无他法。后来，她背着丈夫跑到医院，一番繁琐的检查后，医生的结论使她大吃一惊：“性欲低下竟缘于自己长期饮用牛奶……” 女人的“性”趣克星 　　女人偏食是一种很平常的事情，因为女人天生就擅长随心所欲，可也许这样就会给自已带来许多不必要的麻烦。 　 　不信听听专家是怎么说的： 　　任何食物都含有可能造成过敏的分子——抗原，经人体服食后，抗原会刺激免疫系统，产生抗体。抗体再和其它复合免疫分子结合，如果饮食得当，食物的抗原体间保持恰当的间隔，人体自身“管理家务”的运作系统可能将它们扫除一清。但如果长期服食一种食物，人体的这种本能就会被掩盖，复合免疫分子像雪球一样越滚越大，可能停留在体内的任何地方，阻塞微血管，妨碍血液及体液的流行，导致性能力耗尽。 　　一般来说，女性的身体对复合免疫分子的抵抗力较低，乳腺、眼下肌肤和阴道等易受感染的细嫩组织，会因此红肿或发炎。最新的研究显示，阴道是最先发生过敏反应的地方，这也是偏好食物过敏并发症与女性关系密切的原因。 　　牛奶、小麦、蛋、黄豆、蕃茄、一切发酵制品和化学添加剂，都容易造成过敏反应。但是，每个人的体质不尽相同，某人过敏的食物，也许很适合另外的人，也许有人喝了一辈子牛奶也不会产生性欲低落的感觉，这得视个人情况而定。
个人分类: 食品问题|1996 次阅读|1 个评论
包治百病的“药物”出现了吗？（中）
Puriney 2011-9-30 16:44
甲型流感病毒的万能克星 （呃，好不文采的题目） 严格来说，这次发现的名字叫做FI6（字体的问题，这里是英文字母I而不是数字1）的抗体，不能算是药物，它仅仅是一种抗体，只是能够结合病毒的血凝素而已。说起血凝素就必须分享一下流感病毒是如何侵染正常细胞，以及因此来命名各类病毒的分类原则。 【流感病毒的结构和侵染过程】 如上图所示。HA，即Influenza hemagglutinin，流感血凝素。这类血凝素属于抗原性糖蛋白，可使病毒捆绑在受感染的细胞上。NA，即Viral neuraminidase，神经氨酸酶。 在流感病毒感染机体的过程中，以“悄悄的进村，打枪的不要”的方式进驻人体呼吸道。 神经氨酸酶 充当急先锋，破坏掉呼吸道纤毛上皮细胞的神经氨酸，使黏蛋白水解，召唤出“内应” 血凝素受体唾液酸 （这是体内正常的物质，编者按） ，经过一番相互识别后，病毒上的 血凝素 与受体一拍即合，并牢牢地附着在细胞膜之上。经膜融合后，病毒将自身的核酸物质注入细胞，将其改造为病毒加工厂，平均每个细胞可加工生产10万到100万个新生病毒。新病毒继而又可以感染周围的上皮细胞，就这样周而复始地指数般增长，开始了大规模感染人体的过程。 【流感病毒疫苗的尴尬】 病毒疫苗制作的尴尬在于，嗯，是滴，就在于 病毒变异性很高 。HA和NA都经常发生变化，这样一年前针对此种HA和NA做的抗体，在经过病毒一年的变异之后，也许就变的无用了。 流感病毒变异快的原因，一方面是由于它属于 RNA病毒 ，在增殖复制过程中所依赖的RNA聚合酶 自我纠错能力很差 ，导致子代病毒的基因序列与母代并不完全一致。 下游翻译的蛋白（HA和NA等）就肯定变的不太一样 。随着代数的增多，差异就变得越来越大。如果把疫苗与病毒分别比作钥匙和锁，那么突变的日积月累迟早有一天会导致钥匙再也打不开锁。另一方面，流感病毒的基因组是由8个小片段构成，因此在增殖过程中很容易与其他种类的流感病毒发生 基因重排 ，这也增大了病毒变异的概率。 【FI6的伟大意义】 每个蛋白都是有分子结构滴，一般识别HA的抗体都是此蛋白的 头部 （也就是附图中HA蓝色的头部）。而发现的 FI6是识别HA的根部 （也就是附图中HA红色的部分）。而事实是，头部部分的蛋白序列对于病毒的侵染并不是非常关键，所以发生变异的频率很高。而根部的蛋白序列相对保守。所以FI6能够识别病毒的种类就大大增加了，才有了所谓“万能”的噱头。 FI6的意义在于提供了 “靶向药物” 治疗的定位导弹（好吧，这可是5年前高中的老知识了）。 我的想法是，结合上一篇万能治疗病毒的思路，可以通过 蛋白质融合技术 （protein-fusion），将FI6蛋白和某一种蛋白叉叉融合表达。蛋白叉叉就可以激活细胞凋亡达到治疗效果。 当然根据原文作者的观点，将这一蛋白应用到治疗上还需要更多的实验和探索。 【甲型流感病毒有哪些类型？】 如果知道甲型流感病毒有哪些，就可以一窥此蛋白发现的重大意义了。 H1N1 西班牙型流行性感冒（Spanish flu）是人类历史上最致命的传染病，在1918~1919年曾经造成全世界约10亿人感染。如下图。 以及2009年的猪流感（swine flu） H5N1 1996-2008年间肆虐的禽流感 H2N2 "Asian Flu" 1950s H3N2 "Hong Kong Flu" 1960s H1N2 然后就是类似与HIN1的病毒，现在也正肆虐。 【如何获得FI6和我对生命科学的思考】 这么好的研究结果，我总是会问，这是一开始怎么想到的，以及后续是如何做到的。 之所以原作者会想到做这个研究，是因为 发现了一个现象 ，就是2009年H1N1肆虐的时候，发现有人感染了此病毒，但是自己有抗体，更奇妙的是连甲型流感病毒的其他亚种也都一并免疫了！所以这个叫做Lanzavecchia的人就果断对这种幸运儿的血样进行了分析。 具体过程就是获得他们的免疫B细胞（产生抗体的细胞），经过 多种抗原刺激 ，在免疫应答的 初期 就分离这些细胞。之所以在初期分离，是因为这个时候 早期的细胞 产生的抗体种类是 最多 的。进而在 104,000个B细胞 里找，筛选产生的抗体。终于是找到了FI6，能够针对甲型流感病毒HA里所有的16种亚型都有抗体-抗原反应！ 就这样，FI6诞生了 。 所以， 在我看来，生命科学，从来都是一门探索类的科学 。 关键词永远都是Discovery（探索与发现），绝对没有Creation（创造与发明）。 从现象 -- 推测原因 -- 实验探索 -- 结论分析，这就是生命科学的逻辑思路。尤其是传统的生命科学，比如分子生物学、免疫学之类的（不要跟我提动物植物等宏观的） 如果你对生命了解的比较多，那么应该听说过 转基因 。尤其是一直吵的不可开交的转基因食物（主粮），你可能会说，这不就是在创造新的生命么？虫子吃了就会死的水稻等等。违反自然规律呀！还是建议不要大力推广吧！相应的各种阴谋论、亡国论蜂拥而至更是加重人们的担忧。本人只关心科学和技术，向来很少过问时政，也没的心思去跟没有逻辑的政客们argue。但是眼看着这样的一些没有逻辑与智商人，给一个好好的科技扣上了一顶大帽子，着实觉得冤枉。 这里我不去论证转基因食品的安全性，这里我来论证： 转基因不是违反自然规律！而是严格遵守自然规律！ 转基因严格来说也是discovery逻辑下的产物！ 这里所谓自然规律，就是 中心法则 。DNA转录出RNA，RNA翻译出蛋白质，蛋白质行使生物功能。拿虫子吃了会挂的水稻来说，水稻被转入了外源Bt蛋白基因（苏云金芽孢杆菌）。而若是此基因没有严格按照水稻的基因表达模式来表达，此外源基因怎么会成功表达？生物学家们做的， 只是让外源基因严格服从水稻基因表达的中心法则 。科学家们做的，也就仅仅如此之事。若不是符合自然规律，那么这个基因就不会在水稻里表达。 再深入一层，如果你是一名还比较喜欢生命科学的读者，恐怕会听说一门学科叫做 “合成生物学”（Synthetic Biology） ，这也正是我目前感兴趣并研究的方向。听此学科的名字，就知道——这是要扮演上帝的角色么？没错，这样的争议广泛存在！在一个叫做J. Craig Venter的科学家人工合成的生命（名字是Synthesia）诞生时 ，在经济学人上有这么一篇争议报导。 （限于篇幅关系，以后有空我会补上这方面的更多信息） 那么这个是不是“创造”呢？我还是认为，更加不是，反而更加需要对生命的深刻理解和认识。这类科学无外乎与就是把跨越种的基因，像电路板一样连在一起，行使特定的功能 （更多具体信息可以参考这个系列里的第三部分，囧的是我还没写） 。比如做一头会 发可见萤光的猪 ，就是将能够表达萤光的基因转到了猪里。 (详细浏览 【图说宠物猪】 ) 比如将原核生物的基因在真核生物里表达或者反过来。而这里面需要遵守的原则，还是生命客观规律。越过了，基因就无法表达。 生命科学是一项遵守客观生命规律的学科，从来都不是创造性的学科。转基因如此，合成生物学也是如此。当外表形态发生变化时，不变的是里面运作的规律！ 最后，以一个weibo上可爱的群众问我的问题来结束此段废话的自我思考， Q：“为什么你这么支持转基因？我觉得还是不要大力推广比较好” A：“没了转基因，我学生物的还玩什么？而且不做转基因，国内植物所和农科院的教授们会下岗的” 参考 A Neutralizing Antibody Selected from Plasma Cells That Binds to Group 1 and Group 2 Influenza A Hemagglutinins http://www.sciencemag.org/content/333/6044/850 抗流感“兵器谱” http://songshuhui.net/archives/14244 流感：挥之不去的梦魇 http://songshuhui.net/archives/5948 Influenza A virus http://en.wikipedia.org/wiki/Influenza_A_virus FIRST SELF-REPLICATING SYNTHETIC BACTERIAL CELL http://www.jcvi.org/cms/research/projects/first-self-replicating-synthetic-bacterial-cell/overview/
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[转载]麻疹诊断的床旁检测：麻疹特异性免疫球蛋白M抗体和病毒核酸检测
xuxiaxx 2011-9-26 09:06
目的 旨在评价新开发的用于血清和唾液标本中麻疹特异性免疫球蛋白M抗体检测的床旁检测（POCT）的绩效，并评估麻疹病毒核酸是否可从使用过的床旁检测测试条中回收。 方法 用床旁检测来测试通过埃塞俄比亚、马来西亚和俄罗斯联邦的麻疹监测或疫苗接种计划收集的170个血清标本：其中69个标本的麻疹免疫球蛋白M(IgM)抗体呈阳性，74个标本的风疹免疫球蛋白M抗体呈阳性，7个标本的两种免疫球蛋白M抗体均呈阳性。另外还测试了从英国的麻疹、流行性腮腺炎和风疹（MMR）监测计划收集的282个唾液标本。微免疫麻疹免疫球蛋白M捕获酶免疫测定是用于比较的黄金准则。通过聚合酶链反应对一组24个使用过的床旁检测测试条上的唾液标本进行检测，分析麻疹病毒血凝素（）和核蛋白（N）基因是否可以直接检出。 结果 对于血清，床旁检测分别显示出90.8%（69/76）和93.6%（88/94）的敏感性和特异性；而对于唾液，敏感性和特异性则分别为90.0%（63/70）和96.2%（200/208）。从床旁检测测试条中能可靠检测到H和N基因，并且对N基因可进行基因测序然后进行基因型分析。麻疹病毒基因在20-25°C条件下储存5周之后可从床旁检测测试条中检出。 结论 床旁检测具备麻疹诊断现场检测所要求的敏感性和特异性。然而，其在全球麻疹控制计划中的作用需要进一步评估。 来源：世界卫生组织简报
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抗体能清除中枢神经系统中的狂犬病毒吗？
热度 30 yanjx45 2011-8-2 11:04
许多网友，特别是其中的“恐狂症”患者最喜欢提出这样的疑问：狂犬病毒一旦进入神经细胞，接种疫苗后产生的抗体是否就没有用了？由于血脑屏障 (BBB) 的存在，抗体是否无法进入中枢神经系统 (CNS) ，因而无法清除其中的病毒？狂犬病毒是否会在 CNS 中潜伏，并在多年后发作？ 科学是不断发展、进步的。大量原有的和新发现的证据都表明，狂犬病毒的抗体不仅能中和掉外周神经细胞内的病毒，在一定条件下也可能彻底清除 CNS 中的病毒；而 在任何情况下，狂犬病毒都不可能在 CNS ( 包括脑和脊髓 ) 中长期潜伏。 （一）狂犬病的病理学 WHO 在今年 2 月发布的系列丛书之一“狂犬病的免疫学基础”中就明确指出：“将有毒力的狂犬病毒接种到模型动物，病毒可能在接种部位（通常在肌肉组织）复制，也可能不经复制而直接进入分布在伤口附近的外周神经。 狂犬病毒一旦进入神经元，则它有潜在的可能被中和，虽然早期研究认为这种可能性较低。……有大量实例证明，在病毒暴露发生几天甚至几个月后才进行暴露后预防 (PEP) 也可能会有效，说明狂犬病毒中和抗体 (RVNA) 有时也可能将狂犬病毒从中枢神经系统（ CNS ）中清除。” 狂犬病毒通过伤口或与粘膜表面直接接触而进入体内，但病毒不能穿过没有损伤的皮肤。狂犬病毒又称慢病毒，增殖速度很慢。少量病毒刚进入体内时，不进入血液循环（通常在血液中检测不到狂犬病毒）。病毒粘附或进入几类细胞，例如运动和感觉神经，通过神经内的逆向轴浆流动向 CNS 移动。病毒移动的速度很慢，为每天 15-100mm 。根据侵入的病毒量和侵入部位，狂犬病潜伏期为 2 周到 6 年不等（平均 2-3 个月）。病毒侵入部位越靠近 CNS ，潜伏期就可能越短。在潜伏期，狂犬病毒主要在外周肌肉或神经细胞中存在。 狂犬病的最短潜伏期可能只 10 天左右，通常发生在头面部严重咬伤、又没有同时接种免疫球蛋白的人。疫苗引发的抗体要到 14 天后才能达到一定滴度，对这类潜伏期特别短的病人可能就太晚了。 狂犬病毒是嗜神经病毒，一旦进入 CNS 后会迅速增殖（但仍比其他多数病毒慢），如无抗体抑制，推测数天（如 3 － 5 天）内会感染 CNS 中的大量细胞，从而引发症状。从少数病毒到达大脑，到病毒增殖到一定的数量，并引起大脑功能障碍 ( 表现为发病 ) ，需要一定的时间，也就是说仍有一个较短的潜伏期。但这个时间相对较短，即 狂犬病毒不可能在 CNS 中长期潜伏。 病毒在进入大脑后，在开始快速增殖的同时，也会从 CNS 通过顺向轴浆流动进入周围神经，导致邻近的某些非神经组织（如唾液腺）的感染。唾液腺的解剖位置离大脑实际上非常近。唾液腺等部位可能在大脑功能明显受损 ( 即发病 ) 之前 1-3 天就有病毒分泌出来，即 在发病前一个很短时间内就可能有传染性 。 当然，如抗体产生太迟，病毒不仅进入了大脑，而且已经将大脑的功能破坏了，即如果病人已发病，此时再清除病毒为时已晚，并不能挽救患者的生命。 （二）判断狂犬病发病风险的一个简单实用的标准 狂犬病毒进入 CNS 后，在 3-5 天内，要么被清除，要么发病，即只有很短的潜伏期。狂犬病人一旦发病，通常在一周内就会死亡。在任何情况下，狂犬病毒都不可能在 CNS 中长期潜伏。 狂犬病不存在隐性感染，即不可能像其他某些传染病一样，部分被感染者不发病，而且还可能在随后产生免疫力。狂犬病也不存在所谓“健康带毒”或病后康复 ( 治愈 ) 的可能。虽接种了疫苗，如果在疫苗发挥作用前就开始发病，仍是 100% 必死无疑。 实际上疫苗接种失败多数都出现在第一针开始后的 20 天之内，主要是头面部被严重咬伤的患者。目前的世界纪录是有一例在接种完疫苗后第 3 天仍然发病的。如果过了这个时间还未发病，以后再发病的可能性几乎不存在。 狂犬病毒不引起大脑细胞形态的改变，狂犬病毒在人体内的行踪在发病前是无法检测的，只能根据症状判断功能是否受损。“发病”前检测到足夠高的抗体，就证明其大脑功能尚未受损，至少是未严重受损，他以后就不会再发病。 十余年来，凡在发病前在我们单位检测到抗体效价为 0.5 IU/ml 以上的，没有一例死亡。 曾有实验检测脑脊液 (CFS) 中的抗体来代表脑内的抗体含量。但这种检测技术要求高，风险高 ( 可能造成人为的大脑感染 ) ，通常也没有必要，因在绝大多数情况下来检测的人并未发病，病毒也未进入大脑。 从以上介绍我们可以得到一个基本的结论： 只要在发病前接种完了疫苗，产生了抗体，体内（包括 CNS 内）就不可能再有狂犬病毒“潜伏”。 检索国内外的相关文献资料，基本未发现与此标准相违背的病例。这是一个简单实用的判断标准，可以将绝大多数“恐狂症”患者从对狂犬病的盲目恐惧中解放出来。 （三）抗体能清除 CNS 中的狂犬病毒的若干证据： 1. 　如前所述，有大量统计资料显示，将被狗咬伤后推迟一个月甚至更长时间接种疫苗的人与那些根本未接种疫苗的人相比，仍显著提高了生存率。越早接种，生存率越高。但推迟接种也仍然可能有效。 2. 　西方发达国家用最现代的生命支持系统维持狂犬病患者的生命，某些经积极抢救维持了较长时间生命的患者在死后尸检时，发现全身（包括 CNS ）的狂犬病毒都被彻底清除干净，这证明机体固有的免疫应答能够清除体内感染的狂犬病毒，可以间接证明抗体可进入 CNS ，清除 CNS 中的病毒。只是清除太晚也没有用，此时如果患者的大脑功能已受损，仍不能避免死亡。美国医生 Willoughby ( 他的团队于 2004 年在世界上首次治愈未接种过狂犬病疫苗的狂犬病人 ) 认为，神经传导功能紊乱，包括自主神经功能异常，是狂犬病患者死亡的主要原因，因而通过麻醉抑制患者神经系统功能减退，直至机体产生固有免疫应答，似乎是一种合理的治疗措施。按这一治疗方案，最近又有治疗成功的报导。 （一个附带的问题：有网友提出疑问：死后对脑组织标本进行 DFA 检测是确诊狂犬病的金标准，狂犬病人死后通常脑中充满了病毒，很容易用荧光标记的抗体进行检测、确证。你怎么又说病人死后病毒可以从 CNS 被彻底清除呢？上述“金标准”是否也会不适用呢？ 回复：“狂犬病人在死后体内病毒已经被彻底清除”仅是极个别情况，只出现在国外采取了特殊措施大大延长了病人生命的情况下。“金标准”仍是金标准。） 3. 　数十年来全世界疫苗生产和监管部门用于检测狂犬病疫苗效价的标准试验－－ NIH 试验，也可直接证明抗体能从 CNS 中清除狂犬病毒。 该实验的过程可简述如下：给多组小鼠分别接种不同稀释度的待试疫苗和参考品疫苗，在第 1 天和第 7 天各接种 1 次，到第 14 天，直接往小鼠大脑中注射一定数量的活病毒，看多大浓度的疫苗能保护小鼠在接种病毒后的 14 天内一直成活。 每一批人用狂犬病疫苗在出厂前都要在小鼠体内做 NIH 试验，这类实验所用的预先定量的活病毒是直接注射到小鼠的脑内，等于注射到 CNS 。该实验可充分证明疫苗产生的抗体能清除大脑中的病毒。这样的实验在中国几乎天天在进行。 4. 　全球最权威的狂犬病研究单位之一――美国 Wistar 研究所于 1992 年 8 月在美国科学院院报（ PNAS ）上曾发表一篇题为《抗体介导的将狂犬病毒从 CNS 清除的机制》的研究论文，证明有些单克隆抗体在体外可抑制病毒的传播和病毒 RNA 的转录；在动物实验中，用该单抗对暴露后的小鼠和大鼠进行治疗，证明抗体可清除 CNS 中的病毒，防止致命的狂犬病毒的感染。 小鼠体内实验的过程：按每组 10 只小鼠，接种 5 种糖蛋白特异的单克隆抗体，分别用 4 种浓度（ 10 ， 2 ， 0.4 ， 0.08 IU/0.1 毫升），每只小鼠接种 0.1 毫升到腓肠肌。 24 小时后，小鼠肌肉注射 0.1 毫升 CVS - 24 病毒。动物在接种病毒后观察 3 周，每天记录发病和和死亡数量。结果：单克隆抗体 1112-1 在浓度低至 0.08 IU/0.1 毫升的情况下，仍能保护 80% 的小鼠，而对照组（没有使用单抗）小鼠全部死亡。 大鼠体内实验：将大鼠通过滴鼻感染狂犬病毒。在感染后的不同时间（ 1 ， 2 ， 4 ， 8 ， 12 ，和 24 小时），用单克隆抗体 1112-1 （ 0.1 毫升含有 30 IU 单抗）进行治疗。鼻内接种病毒后，狂犬病毒基因组在感染后 6 小时在嗅球处可检测到，感染后 12 小时在中脑处可检测到。在感染后 12 和 24 小时进行治疗，分别有 100% 和 80 ％的动物没有狂犬病毒感染的迹象， 30 天后在幸存的动物的大脑未能检测到病毒 RNA 。与此相反，所有未使用单抗的动物死于狂犬病毒感染。这个实验表明，抗体能介导狂犬病毒从被感染的神经组织的清除，从而防止了致命的狂犬病毒脑脊髓炎导致的死亡。 5. 　有些正在试验中的新型狂犬病毒减毒活疫苗在小鼠已发病但处于发病早期时接种，仍能挽救小鼠的生命，这也证明抗体可能进入 CNS ，而且病毒本身可在 CNS 中产生抗体。 （四）机理：抗体如何通过血脑屏障？ 抗体如何通过血脑屏障（ BBB ），达到感染的神经元？ BBB 的通透性是相对的而不是绝对的，会受很多因素影响而发生改变。新的资料证明抗体也可在脑脊液中检出，但由于 BBB 的存在，与外周血液中的抗体相比，在脑脊液中虽然也可检测到中和抗体，但出现的时间稍晚、浓度稍低。 狂犬病毒的颗粒含有多种 ( 多个 ) 蛋白质和核酸大分子，每个病毒颗粒比单个的抗体分子的体积要大许多。比抗体分子大得多的狂犬病毒颗粒是怎样突破 BBB 进入 CNS 的呢？推测狂犬病毒作为嗜神经病毒，为能成功地入侵 CNS ，必然具有能主动地导致血 / 脑屏障破坏的功能。已知一种嗜神经的流感病毒在小鼠中就会显示这种功能。推测狂犬病毒也能破坏 BBB ，改变其通透性。据此也可推论狂犬病疫苗诱生的抗体也可能利用 BBB 在病毒感染状态下通透性的改变，乘机涌入 CNS ，追杀狂犬病毒。 在前述证据 4 的实验中，狂犬病毒感染的大鼠用抗体治疗后，其大脑在显微镜下未发现神经细胞受损伤的迹象。在 CNS 中，狂犬病毒抗体介导的病毒清除机制，不同于抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用或补体依赖的裂解作用。抗体可以在 CNS 遭受病毒入侵后，抑制病毒从细胞到细胞的传播，阻断病毒 RNA 的转录和复制，从而阻止病毒感染。除了抗体，病毒感染诱导的细胞因子、神经肽和神经递质等其他因素也可能参与清除过程。 总的来讲，尽管目前可以肯定，狂犬病毒中和抗体在一定条件下也可能彻底清除 CNS 中的病毒，但与其他许多嗜神经病毒相比，对狂犬病毒抗体的相关作用机制的了解还不是很清楚，有待进一步深入研究。
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答xxm2002网友——抗体滴度总会降低
热度 1 fs007 2011-1-19 12:39
寻正 『 返回疫苗专辑主页面 』『 查看乙肝疫苗简述 』 由于系统原因，我反复收到这位网友关于同一问题的询问，这是我的第三次回复，前两次的回复系统回报说送达该网友的留言板了，而我估计这位网友只是普通网友，要么没有留言板，要么注册的目的就只是便于给博主留言，并不关注自己还有个留言板。这样的问题有普遍性，解答对他人也具有一定的参考价值，因此，我在此公开回复这位网友的提问。 问 ：你好，我儿子快9周岁了。从出生开始打乙肝疫苗已有4回，每回都打3次北京产的疫苗。每回都产生抗体，不过抗体维持的时间也就一年左右。这种情况应该怎么办？是不是改打进口疫苗？另外，孩子8个月时和2周岁10个月的时候分别打了麻疹疫苗。孩子2周岁到2周岁半之间分别打了风疹疫苗和腮腺炎疫苗一针，还需要加强吗？ 谢谢！ 答 ：你的儿子可以考虑再接种一次腮腺炎疫苗。 如果我的理解正确的话，你的儿子接种乙肝疫苗有4X3=12次了，对此我无比吃惊与遗憾，这是典型的滥用疫苗，既浪费资源，也增加了不必要的痛苦与不良反应的风险。比较激进的做法是接种推荐的三剂次以后，每5-10年再加强一次，事实上这都未必很有必要，最新研究表明乙肝疫苗的保护期远比以前想像的要长，估计20-30年是没有问题的，说不定终生都有保护力。 这位网友之所以接种这么多次，估计是对抗体滴度的理解有误。任何疫苗免疫以后，抗体滴度总是持续降低的——抗体是人体对外来异种抗原的反应，是一种清除机制，如果威胁不存在了，还持续产生高滴度的抗体，就浪费了，上帝设计我们人体比较有效率，当威胁不存了时，人体就慢慢降低滴度，直到若有若无，几乎检测不到。抗体是清除机制，是保护机制中的一个环节。免疫系统对疾病的抵抗力来源于免疫记忆细胞，若下次受到同样的病原（抗原）侵犯时，免疫系统可以快速地产生足够的抗体应付，人要么不发病，要么发病都极轻微。没有记忆细胞的发病过程往往是当身体产生足够高滴度的抗体时，损害已经发生了，这就是疫苗的保护作用。 如果这位网友是在医务人员的指导下进行如此疫苗滥用的，那么这样的医务人员缺乏基本的免疫学知识，不值得信靠。请大家查看我的针对各个疫苗的简述，如果有医务人员推荐超过我的简述中的疫苗剂次，需要向专业人员查证，避免这样的滥用。 『 返回疫苗专辑主页面 』『 查看乙肝疫苗简述 』
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国家抗体中心主任郭亚军教授访谈录 (Interview to Yajun GUO)
baoyu 2010-12-25 13:49
梦想在左，爱在右 抗体药物国家研究中心主任 郭亚军教授访谈录 魏玉保 申未然 /整理 2008 年郭亚军教授荣获国家科技进步二等奖（一等奖经常处于空缺状态），国家技术发明二等奖。获得其中任何一项国家级大奖都是很难的，而一个人能够同时获取两项，可见郭亚军教授的专业成就和杰出贡献。 2009 年 5 月，胡锦涛主席签署命令，授予第二军医大学肿瘤研究所所长郭亚军教授一等功。 2009 年 6 月中旬，我们对郭亚军教授就科研、创新、药物研发等问题进行了访谈，以下是具体内容。 成功的必然 主持人：我们不仅为我们的郭教授高兴，也为我们学校高兴，郭教授非常的谦虚，这项荣誉不是一天、两天能够获得的。 主持人 ：郭教授，祝贺您获得了一等功的荣誉，我们知道，您从一名普通的士兵、成长为知名教授，出过国，您在美国生活了 15 年，但是毅然放弃了美国优厚的生活，开创了一片新天地，并获得了巨大的成功。那么，郭教授，您能不能用您的传奇 经历和精彩人生为我们指点下，你的成功有哪些因素是必不可少的？ 这个问题提的很好。不过，第一个，我没有成功。第二个，我也没有放弃什么优越条件，我觉得现在中国的条件比美国好多了。经济危机，大家都知道。实际上，大家都很害怕，我抓住了机会。实际上，什么是优越条件，在人们的观念中，有房子，有车，有游泳池，有很高的工资，这个不一定是优越条件。但是你吃不到小龙虾，你也吃不到小肥羊，在中国，我们有这个情况，尽管我们工资不高，实际上消费水平也不高，更重要的是有一个氛围。在美国，我们不是讲他们自私，实际上，他们有自己的文化，有他的民族习惯，他们比较 actually ，就是个人与个人之间，我不要占你的，你也不要占我的，大家公平相处。在 neigborhood ，一个邻居，十年了，我还不知道他叫什么。大家倾向于不打交道。 在美国生活那么长时间，实际上在第 4 年就回国建立这个中信国建这个，实际上有一个衔接的过程，我从 14 岁就进了部队，我对部队的生活非常熟悉，也非常喜欢，在座的很多人不一定很熟悉军队，大家经过军校之后就会知道，军队有他很鲜明的特点，也类似一个社会，是一个集体，战斗集体，所以融洽性很高，当你适应久了之后，再到一个陌生环境，你就会知道，他的优点。现在年轻人很喜欢美国式的生活，没有约束，自由自在，当你在美国生活久了之后，你就会知道，当你没了约束，你会很不习惯，这是一个长期生活的结果。所以，我 14 岁的时候，就一直在战斗的最前沿，我当了 4 年工程兵，不知道大家对工程兵有什么概念，铁道兵和工程兵，也就是打坑道，修铁路，修公路，基本上 4 年没有过过 ，主要是搬石头，对部队生活适应。在美国 15 年，我都是穿着军装的，但是有一点，我不是间谍。 主持人 ：在您成功的历程中，哪些素质是最重要的？您的刻苦，一些机遇，或者是团队精神，给我们在座的研究生一些经验？ 我们的年代和你们的年代，有很多不一样，确切的说，科研，临床教育，应该说我们有很多类似的条件，只是说现在的条件比我们当时好多了。但是有很多特殊的时候，比如我上大学那一年，不知大家有没有看过所谓文革的书，有些情况你们也许知道，张铁生，就是交白卷。我上学的那年，就是交白卷的那一年。很多学生基础很差，一元一次方程都不会结，考清华、北大也一样。所以有人提出不要考试。在大学里，我管了 13 名教授，他们负责打扫教室，把教室打扫干净。但是我们很尊重他们。我喜欢医学，教授手把手的教我们，当时与很多教授关系很好。 考研究生的时候，有时第一次允许招生。我考了 2 次， 2 次都是第一。但是，当时我在济南军区总院做外科医生，总院是不允许来的，不干满 3 年不行。所以我第二年又考了，我第一医学博士也是这样的，之后有时全国第一个医学博士后。我那个年代，基本就这个情况，年龄差距很大，我的班长比我大 13 岁。那个时侯，主要是机遇，你要学习，在任何时候都能够学习。接着就是改革开放，大批人员出国，从 1978-1988 ，连续十年，大量的人员外派，所以你看现在回来的教授，大都是那时候出去的，现在都是科学院的院士，科学院的院长。现在大量的海外学者归国。所以，是很好的时机，不是大量人员外送。我们现在的研究条件，就第二军医大学的几个著名实验室来说，比美国、欧洲，一点不比他们差。就我们的仪器设备、就我们的支撑条件，和国外一流实验室没有差别。但是，十年以前，十五年以前，差别相当大。对那个时候，应该是外派，利用国外的研究条件。 肿瘤治疗，人定胜癌 主持人： 肿瘤治疗有哪些进展，能不能攻克？人定胜癌？ 这是一个很好的问题。还需要病理学的深入研究。就像上世纪二三十年代的肺结核一样，那时候的肺痨病，无法治疗。后来发明链霉素后，知道它是结核杆菌引起的，就可以针对它治疗。包括艾滋病，它的病因是 HIV, 艾滋病的根治肯定在肿瘤之前。肿瘤，关键是病因还不清楚，基本上定义为全身性的疾病，局部的表现。这样可以解决很多临床问题。比如，同样一个肿瘤，有的转移，有的不转移，有的可以带瘤生存十年，有的不到半年就去世了，这当中的差别就是一个全身的因素，我们过去只注意了局部的全身的因素，没注意全身的因素，一个真正的好的医生，必须注意综合的治疗。叫做个体化综合治疗方案。绝对不可以片面性治疗。先来到外科，一看可以手术，先取出肿瘤。手术之后做什么，到不到内科，这是病人自己决定的。这样是错误的。所谓综合治疗方案是什么样呢？在美国，有肿瘤中心承担，一般有五大科室组成，有外科，内科，放疗科，综合治疗科，诊断和介入科，这五个科室在第一时间都可以看到病人的资料，所以一开始病人去其中的那个科室，就可以确定了，并且之后去那个科室进行治疗，都定下来了。 所以治疗效果非常好。第二个曙光，是靶向治疗 - 抗体治疗，这也是国家抗体中心的目标。举两个例子，第一个药物是菲和，化疗后有百分之七八十要转移的，这个药，在第一个疗程，有些病人就可以终身治愈。这是攻克癌症的一个契机。第二个就是赫赛汀，对乳腺癌的治疗， her-2 阳性的乳腺癌能够完全治愈，对 5 年的非瘤生存率，也就是说肿瘤切除之后 5 年，能够到达 75% 的的生存率。而之前是 2% 。这其中的进步就很多了，给我们带来了很大的希望。 攻克癌症是从你们的思考角度而言，对我们来说，提高病人的生存质量，生命得到延长，是我们这一代努力的。今后要几代人才能攻克。刚才你提到益赛普对应风湿性疾病，这个是临床研究最具有代表性的。你们可能会问，郭教授是做肿瘤的，为什么做自身免疫性疾病呢？自身免疫性疾病是机体免疫机能失调，是过强的一个表现，而肿瘤发生，是机体免疫受到抑制的一个状态。而我们做研究，不要留下终生遗憾。也就是做免疫耐受，你想做免疫增强，免疫增强的机理是什么，当你认识到免疫增强的方法后，你认识了一个免疫增强的疾病，之后你自然会 移植到免疫耐受研究中去。任何一个科学，都是画成圈的，之间相互联系。 你们作为研究生，希望发高分文章，论文做的更好。当然这是很好的希望，要注意你的基础知识要有，这很像种玉米，就一辈子种玉米，其实在收成之后，你可以再种一季，这是一个很好的启示。 得英才育之 主持人： 您能说一说哑铃模式吗？ 我们知道，由于军队的特殊体制，外派并不容易。但是在国外，我还有机会参与欧洲的课题。开阔一下视野是对的，国家留学基金委有一个资助名单，我们学校每年都有几十名。以前去国外是开阔视野，现在有了 Internet 后无所谓开阔视野。从文字上，从画面上都可以看到。现在我们国家是全方位开放，是一个立体的，不存在长见识一说。在生物学领域，美国、欧洲可能比我们进步一点。就从西医、中医的区别来看，西医就是西方医学，但是它不占主要优势。大家看一看国内几个好的实验室，我们 science nature 文章很多，不像以前，全国每年也就一两篇。 主持人： 您还会送您实验室的研究生去国外留学吗？ 当然会。应该说我们肿瘤研究所的硬件条件很好了，每年从国家得到的资助也很多。我们步教授博士毕业刚 5 年，就牵头了一个六千万的课题。应该说这个在国外要几十年才有可能。 主持人： 若是不能到国外学习，您觉得我们做怎样的努力才能弥补这方面的不足 ？ 也不一定每个人都有必要出国。但是我打包票，您们每一个人都能够出国交流，为什么这么说，因为从目前国内交流的趋势来说，不是我们要去欧美，而是今后欧美的学者要到中国来。另一方面，国际上的大型会议都在中国举办，六大王牌的国际会议，都在我们国家举行，北京、上海、天津、广州等地方。只要是从事生物学研究，以及相关学科的研究，都有今后参加这些国际会议。我们国家的十二五计划当中，我可以透漏一下，对人才的支持力度占了总经费的四分之一之多，参加研究人员进行国际交流。 主持人： 郭教授，说起基础研究，现在医学院的学生有一个现象，往往轻基础，而重临床，您作为一个临床医生，基础研究又做的很好。 您是怎么看待临床和基础的？ 其实我们作为医学院校，有常规的临床学科，也有一些交叉学科，但是真正医学院校的医生，应该是研究的中坚力量，在美国、欧洲，你可以从发表的文章看到，发表文章的往往不是 PH.D, 而是 M.D, 他们的研究是很贴近临床的。也就是大家经常听到的 translational research 转化医学，科学问题是临床提出的，在实验室研究之后，再回到临床去。相反，如果你不是医学院校，比如做 transgene animal ，做线虫，很有意义，这是 pure science. 真正做科学出名的，你看诺贝尔奖得主中， MD 很多，而不单是 PHD. 应该说，临床越来越是基础研究的发起者，也是基础研究的归属，如果大家明白，临床医生和基础研究应该是一个配合，必须要配合。而现在为什么讲轻基础，重临床，这里面有两个原因。历史的原因。第一个，多年来，从我们医学院校培养的多是临床医生，第二个问题，是我们进入临床之后，我们的医院是高度不均一的，三甲医院医生忙的要死，三甲以下医院医生很清闲，医生做科研的都在三甲医院，要有十几年、二十几年的积累。另外一方面，我们国家最近几年才把经费投入基础研究。所以一个是资金问题，一个是支撑条件问题。在临床工作的，灰色收入比基础高很多，这个是不可争论的，你们不要跟我讲，你们去临床没有这个想法。如果，你们去医院经济利益驱使着，你们不如去做生意，那样来得更快。所以不能把它作为一个基本的谋生手段，这是一个很高尚的事业。研究人是最高尚的，当然研究实验动物也很重要。今后以基础医学研究为主体的，这么一个形式很快就会实现。从今年开始， 2010 年，我们的自然科学基金委，将会就生命科学中分出来基础医学部，将有一大块资助。现在的医生将有更大的机会认识一些疾病的发病机制。最后一点，医生什么时候才能对基础产生浓厚的兴趣呢？一个医生，成功的医生，能够做别人所未能作。如果一个医生，别人能做的，如肿瘤科医生，切除肿瘤就是了。但是你能够用靶向治疗，局部治疗，把一个不能手术的别人变成可以手术的，手术后又可以根除，不会转移或复发，这样才是名医。你有什么不一样，让别人信服，才是我们所要努力的。 人人可创新 主持人： 我们要去想一想，问题背后更深层次的？ 首先要博览群书，要有基础知识。你光在那里想，没有基础，也就是一天三顿饭，很简单。 这是我们研究生创新的一个先决条件，多看，多思考。 这不是我的话，你想站在巨人肩膀上，你的资料掌握的越多，信息量掌握的越大，你就不会做一些劳而无功的事，你能选的很准。在座的学生，为什么差别那么大，有些做的非常好。实际上，有些人做的比那些发了好文章的人还要累，他为什么做不出呢？我带了那么多的研究生，实际上，在座的就有一些，有的已经做了教授，东方学者，我给他们最大的一个启示，经常讲的，我们之所以失败，就是资料掌握不全。要尽可能掌握很多的信息，现在条件有了。很多实验条件，怎么摸，实际上，这种条件，别人已经做很多了。你这就是很大的浪费，还有就是写作文章上，创新没有临界创新，如果要有创新，就没有辞典的，英美研究者，给我最大的 training ，就是写文章。所以大家在写英文文章时，写中文文章不存在这个问题，有些人写的很好，不过有些人的中文文章写的一塌糊涂。首先要学好中文。写英文文章时，要记住，千万不要去造句。造的句子外国人是看不懂的，你们应该去抄句子，这不是抄袭，因为英文也有古典文学，一定要套用句子，用经典句子把你想要说的，写出来。这样别人才能看懂您的文章，省了很多精力。 主持人： 您刚才说过全面收集资料，现在有 Internet ，搜集很多资料时，划一个圆时，可能从这一点连到那一点，可能会偏离了原来的方向 ，如何把握原来的研究方向？ 您为什么得了此次一等功 ？ 硕士阶段重在接触科研，学习实验技术，博士阶段重在设计，科研的设计，思路的总结。当你在不同阶段收集资料时，从哲学的角度说，每一个点不可能走到那一点不动，比如一个细胞因子既有正调节，又有负调节，有很多的影响因素。若你是做神经再生的，那么要把神经再生的文献作为第一线资料，第二项资料是做其它细胞再生的，因为有其它思路和技术能够用到神经再生当中。第三线是很多新的技术方法，比如新的基因，也许会有关。 五篇最主要的代表性文章，十五篇相关的文章，我要求我的研究生，掌握近 5 年的文献，因为每篇文章都有 introduction ，都是 review ，所以你不会遗漏相关知识。硕士研究生读过文献，要有自己的想法，博士生，要能够提出自己的思路，在此基础上，导师对你进行引导，导师导师，并不是从零点教你。这一点，大家要明白。 性格与命运 观众 ：性格决定命运，科学工作者是不是具有一定的性格 ? 您说起过发散的思维，实际上真正有发散思维的人，他很难集中，不容易聚焦。 不是这样。作为著名科学家，像爱因斯坦，从隧道效应出发，我这人就是放任不羁，我才能做出。实际上，之所以有研究生 博士生 博士后这样系统的训练，一开始对研究生的要求并不高，训练怎样做到一个正确的思维，这个和个性有关系吗，有关系。一天到晚，人与人之间有太大的区别。当然有些人，正常的思维是建立在你正常的学习态度之上的。有的学生，我对他恨铁不成钢，恨不得踹他两脚，他就不学。我相信天资和天分，但天资和天分不是关键因素，有些人没有天资和天分，但他很执着，很吃苦，也能够有所成就。这不是说，生活在好的环境中就不好，生活在差的环境中，因为他有穷则思变的基本想法，所以会做的很好，生活的艰苦不一定是坏事。一个真正的科研人员他的成功要有三个因素 : 第一个必须吃苦，第二个是热爱科研，第三个具有正常的思维。
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非典型狂犬病一例报告
热度 5 yanjx45 2010-12-20 09:38
严家新 鲜文 徐葛林 冯彦文 郑新雄 祝玉桃 刘碧芬 作者单位： 430060 武汉生物制品研究所 ( 严家新、徐葛林、郑新雄、祝玉桃、刘碧芬 ) ；武汉市疾病预防控制中心 ( 鲜文 ) ；武汉市传染病医院 ( 冯彦文 ) 2004 年 12 月，武汉市江夏区发生一例疑似狂犬病死亡患者，经调查确认系 非典型狂犬病病例。 死者 61 岁，武汉市江夏区郑店街某村农民。发病前无外出史，未发现有心、脑血管疾病史，健康状况正常。 2004 年 9 月 25 日，该患者被本村邻居自养犬咬伤左踝关节处，当时未作伤口冲洗及消毒处理。 12 月 15 日出现全身发痒症状， 16 日外出回家时感觉骨痛， 17 日出现下肢瘫软等症状，送当地区医院诊治，因疑为狂犬病即转往武汉市传染病医院就诊。院方知其有犬伤史且有喝水打呛表现，初诊为狂犬病。由于患者家属不同意住院而返回家中，尔后数日患者未作任何治疗。 20 日患者出现下肢瘫痪、衰竭症状，被送往广州军区武汉总医院住院诊治，诊断为昏迷待查；吸人性肺炎。 12 月 25 日患者因呼吸衰竭在家中死亡。 该伤人犬外观正常 ，但有进食不爽、发声低下表现；该犬咬伤死者前曾与同村另 2 只犬打斗，并致死其中一只。此犬伤人后，被犬主带回栓系时又咬伤男主人手腕。由于连伤 2 人，该犬被犬主施以饿罚， 3 天后犬主将毙亡犬弃于村外后被其他村犬分食。 犬主认为该犬伤人前后并无过多异常，但现在看来，该犬当时已属可疑疯犬。 该死者被咬前后未使用过狂犬病疫苗和抗狂犬病血清 ( 或狂犬病人免疫球蛋白 ) 。 12 月 20 日，死者生前在家中由郑店卫生院检验员采集血标本和痰液标本各一份，当即送往武汉生物制品研究所基因工程室检测。经采用 ELISA 方法分别对两份标本进行抗狂犬病抗体及狂犬病抗原检测，结果均为阴性 ( 抗狂犬病抗体滴度为零 ) 。 24 日武汉市传染病医院再次采集血样送武汉所基因工程室采用 ELISA 方法检测，结果为抗体阳性，用快速荧光灶抑制试验 (RFFIT) 进一步检测，确定抗狂犬病中和抗体滴度为 4 ． 2 IU ／ m1 。 讨论：① 病例的确定性 ：死者有被可疑疯犬咬伤史，未及时冲洗处理伤口，且发病前后未接受任何主动和被动免疫预防措施，经过 80 天潜伏期后发病，出现皮肤瘙痒、下肢瘫痪等症状；患者经血清学检测结果为抗狂犬病抗体阳性，且滴度较高 (4 ． 2 IU ／ m1) ；发病 10 天后因衰竭昏迷导致死亡。 由于狂犬病毒的抗体不可能在隐性感染的情况下自然产生，故对于从未接种过狂犬病疫苗的患者，抗体检测的明确阳性结果可确诊其为狂犬病。 ② 病例的特殊性 ：一般将狂犬病病例分为狂躁型和麻痹型两种。典型的狂犬病病例多为狂躁型，且表现有恐水、畏光、吞咽困难等狂犬病特异症状。死者发病期间缺乏上述狂犬病特异恐水症，病程较国内常见时间 (3 7 天 ) 稍长，可认为该病例是一个不典型 ( 麻痹型 ) 的狂犬病病例。 ③ 相关病例 ：被该犬同时咬伤的犬主，亦未接受抗狂犬病免疫预防接种，迄今状态良好。 因狂犬病的潜伏期有可能长达数年，所以我们曾多次建议该犬主应尽快补种全程狂犬病疫苗和抗血清 。 ④ 传染来源 ：可疑犬伤人前数月，无离村外出史，死者所在村也未发现有外来疯犬或可疑犬窜人骚扰。全江夏区在前 3 年中，仅于 2003 年 7 月在距死者住地数十里的某乡报告过一例狂犬病确诊病例。因此，该狂犬病例的传染来源有待进一步探究。 ⑤ 实验室抗体检测的诊断价值 ： 由于狂犬病毒的抗体不可能在隐性感染的情况下自然产生，对于从未接种过狂犬病疫苗者 ( 如本病例 ) ，抗体检测的明确阳性结果，对狂犬病诊断有肯定意义；而有文献资料显示，抗体检测的阴性结果则不能完全排除狂犬病。 ( 收稿日期： 2005 07 07)
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一对冤家：抗原与抗体
cherrylu1960 2010-6-24 22:33
俗话说，道高一尺，魔高一丈，在长期的进化过程中，人体形成了许多对付外敌的办法，在我们的身体中，每时每刻都发生着免疫之战。 抗原和抗体之间的反应，是免疫大战中的主角。也是免疫学研究的一个重要方面。 抗原是免疫系统要对付的一类物质，说白了就是一些高分子有机物，蛋白质是其中最重要的一类。此外，还有许多多糖和脂类成分，都可以激发机体的免疫应答。 细菌、病毒等微生物侵入人体，能激起人体组织的免疫反应，所以微生物抗原是一类主要的抗原，其本质也是蛋白质。 对于细菌等病菌，人体的免疫系统并没有能力识别它们的整体是长得什么样子，可它们却能识别细菌的分子结构，别看细菌个子很小，但仍然有着复杂的结构，它小小的身躯上有很多不同的化学物质，这些物质中有一小部分能引起人体的免疫反应，这部分就是细菌的抗原。 再拿病毒来说，它有着像花衣服一样的外壳，外壳的成分是一种蛋白质，这种蛋白质就是一种抗原，也可以激发人体的免疫应答。 除了微生物抗原之外，还有许多高分子物质能激起人体的免疫反应，它们都属于抗原。人体中本身存在一些抗原，最典型的是人体组织相溶性抗原，简称HLA，它是一种强免疫原，可以激发强烈的同种异体免疫反应。（另文说明） 青霉素很容易引起人体的过敏反应，所以在注射青霉素之前要做皮试。青霉素及青霉素制品中的微量杂质进入人体后，附着在其它分子之上，就扮演了抗原的角色，容易引起一些人的免疫反应，有时这种反应还能致命。 在有机分子家族中，抗原分子属于大个子，分子量都很大。正如老吊车，身体很庞大，但只靠伸出的一只臂就能抓住重物，抗原分子也是一样，它身体的一部分会被淋巴细胞识别，这个结构正是刺激免疫系统产生抗体的关键所在，就是人们所说的抗原决定簇。 到医院看病时，在血清学及免疫学检查的化验单上，会发现IgA,IgD,IgE,IgM等项目，一般人们不太注意它们代表什么意义。这些符号所代表的物质正是我们身体的免疫士兵产生的对付外敌的大分子物质抗体，是一类称作免疫球蛋白的物质，Ig（ Immuloglobulin ） 是它的缩写符号，A，G，M等则代表不同种类的蛋白质。 抗体分子也是非常巨大的，同抗原一样，抗体分子上也只有几处特别的区域（可变区）能结合其它分子。 抗原和抗体仿佛是一对天生的冤家，在抗原的刺激下，免疫系统产生抗体，它会去结合抗原，但这种结合目的，并不是什么友好的联合，而是使它使去活性，这就像一只活蹦乱跳的老鼠被夹住了，很难再去搞破坏了。 奇妙之处就在于，抗原决定簇和抗体可变区之间的关系，就像蛋糕和做蛋糕的模子一样，能够严丝合缝地结合在一起。不过，一种模子只适合做一种蛋糕，如果把一块做成的蛋糕试图放进不同的模子，肯定不能嵌入得严丝合缝，这有点像一把钥匙只能开一把锁。 这样，也就能解释，如果通过接种疫苗，体内已有一种感冒病毒抗体，但如果病毒产生变异，原来的抗体就不起作用了，需要通过接种新的疫苗，诱发新的抗体。 感冒病毒太容易变异了，但相信致命性一般不会很强。所以，俺相信自身的免疫力没什么问题，所以至今还没有去接种过流感疫苗呢。
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抗体点膜
asssan 2010-5-22 11:51
做生命科学研究，几乎每个实验室都用抗体，因此，抗体的效价对试验尤为重要。不知是运输还是抗体批次缘故，好多抗体效价并不令人满意，本人实验室就买到一点效价都没有的抗体，如果不进行点膜，检测抗体效价，匆忙试验，就造成时间和标本的浪费。所以，目前，我建议我们实验室对新买的抗体先进行抗体效价鉴定，然后做试验。我做抗体点膜的基本步骤如下 （1）用TBST配制5%BSA或脱脂奶粉，取0.5微升抗体溶解于上述溶液50微升，稀释度为1：100，然后对比稀释成1：200，1：400，1：800（当然可以有更高的稀释度） （2）各取10微升点膜（作好标记），晾干，室温约10分钟 （3）用5%BSA或脱脂奶粉封闭2小时 （4）加相应的二抗（我们实验室是用Rockland的荧光二抗），室温2小时 （5）回收二抗，用TBST洗三次，每次15分钟。 （6）扫描（我们用的是Odyssey Fluorescent Scanner (LI-COR Bioscience, USA)，很好用哦。 下面是我做的两个个抗体的效价检测，一个抗体根本就没有效价，目前正在和公司交涉。
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抗HIV抗体2F5和4E10研究进展信息分析
xupeiyang 2009-11-14 12:00
http://www.gopubmed.org/web/gopubmed/1?WEB0slirnuhkrhkfIoI1I00f01000j10040001rl 2F5 and 4E10 and HIV HIV-1 94 of 104 documents semantically analyzed Top Years Publications 2009 26 2008 18 2007 17 2006 11 2005 10 2004 6 2001 4 2003 1 1996 1 Top Countries Publications USA 54 France 7 Netherlands 6 China 4 Spain 4 Austria 4 South Africa 3 Switzerland 3 Canada 2 Germany 2 Portugal 1 India 1 Thailand 1 Israel 1 Taiwan 1 1 2 Top Cities Publications Durham 9 Boston 8 New York 6 Amsterdam 6 Bethesda 5 Seattle 4 Frederick 4 Wien 4 Beijing 3 Paris 3 Jo'anna 3 Bilbao 3 Zrich 3 Rockville 2 Grenoble 2 Atlanta 2 Madison 1 Irvine 1 Toronto 1 San Francisco 1 1 2 1 2 Top Journals Publications J Virol 34 Virology 9 Aids 7 Proc Natl Acad Sci U S A 3 Vaccine 3 Curr Hiv Res 3 Aids Res Hum Retrov 3 Bing Du Xue Bao 2 J Immunol 2 Biochemistry-us 2 J Biol Chem 2 Plos One 1 Mucosal Immunol 1 Chembiochem 1 Biochemistry 1 Microbes Infect 1 Biochim Biophys Acta 1 Febs Lett 1 Retrovirology 1 Faseb J 1 1 2 1 2 3 ... 32 Top Terms Publications HIV-1 94 Antibodies 92 antigen binding 92 Viruses 78 Epitopes 72 Humans 72 Antibodies, Monoclonal 70 gp41 67 HIV 65 HIV Antibodies 58 HIV Envelope Protein gp41 55 Neutralization Tests 55 Vaccines 54 Vaccination 54 HIV Infections 40 Amino Acid Sequence 37 Immunization 36 Immunity 35 Peptides 32 Membranes 32 1 2 3 ... 32 1 2 3 ... 29 Top Authors Publications Katinger H 19 Stiegler G 17 Burton D 8 Kunert R 7 Vcelar B 6 Zwick M 6 Montefiori D 5 Wang M 5 Joos B 4 Binley J 4 Liao H 3 Yu H 3 Zhang M 3 Morris L 3 Mehandru S 3 Markowitz M 3 Armbruster C 3 Ruprecht R 3 Haynes B 3 Alam S 3 1 2 3 ... 29 http://www.sciencenet.cn/htmlnews/2009/11/225107.shtm 研究发现两种抗体对抗艾滋病毒机制 为艾滋病疫苗的研制指明新方向 美国杜克大学医学中心研究人员发现了两种强力抗体2F5和4E10阻断艾滋病病毒（HIV）感染的机制。该发现为研制新的、更有效的艾滋病疫苗指出了一个新方向。相关研究刊发在美国《国家科学院院刊》（ PNAS ）上。 美国杜克大学医学中心人类疫苗研究所的S穆尼尔阿拉姆博士和哈佛医学院的儿科助理教授陈兵（音译）博士一起，对两种对抗HIV的潜在强力抗体2F5和4E10进行了研究。这两种抗体十分罕见，属于广效性中和抗体，它们能够阻断若干不同的HIV毒株。HIV有其致命的薄弱之处，即所谓的病毒外层包膜近侧区。在这一区域靠近病毒包膜的一部分外蛋白质层，会在细胞融合和感染过程中短暂开放，从而使病毒有几分钟的时间暴露在抗体面前。而这两种抗体正是利用这个机会与病毒绑定，从而阻断HIV。 但要控制病毒感染，还面临着这样的问题：在艾滋病病毒感染者中，这两种抗体十分罕见，而目前的试验性疫苗还不能产生这些抗体。此外，这类抗体的机会之窗也十分狭窄。 病毒目标区域只开放几分钟也许只有15分钟甚至更短。阿拉姆博士说，除非抗体与目标十分接近，并做好了准备，否则就不会起作用。这意味着我们要设计出新型疫苗，可诱导更多的这类抗体，让它们在感染的最初阶段即投入战斗。 2F5和4E10都具有很长的、一圈一圈的蛋白质片段，这些片段具有疏水性，这意味着它们容易被脂质吸引。研究人员发现，抗体要成功对接到HIV的外膜区域，有赖于抗体可依附在HIV外层类脂包膜上，而这些包膜中就含有脂质。 该研究团队已开始设计一种含有脂质成分的疫苗。该论文的合著者、人类疫苗研究所主任巴顿海恩斯指出，在这些中和抗体的所有功能中，病毒粒子脂质反应性作用给他们的研究提供了一个关键性切入点，即免疫系统需要看到什么才会产生这类抗体。他们基于这些发现而设计出的新型疫苗，目前已开始进行动物试验。 更多阅读 美国《国家科学院院刊》发表论文摘要（英文） http://www.pnas.org/content/early/2009/11/10/0908713106.abstract?sid=407af014-6a89-4988-8d04-144fece8b253 Role of HIV membrane in neutralization by two broadly neutralizing antibodies S. Munir Alam a , 1 , 2 , Marco Morelli b , c , 1 , S. Moses Dennison a , Hua-Xin Liao a , Ruijun Zhang a , Shi-Mao Xia a , Sophia Rits-Volloch b , d , Li Sun e , Stephen C. Harrison a , d , f , Barton F. Haynes a and Bing Chen b , f , 2 + Author Affiliations a Human Vaccine Institute, Duke University School of Medicine, Durham, NC 27710; b Laboratory of Molecular Medicine, Children's Hospital, d Howard Hughes Medical Institute, and f Department of Pediatrics, Harvard Medical School, 320 Longwood Avenue, Boston, MA 02115; c Program in Virology, Harvard Medical School, 200 Longwood Avenue, Boston, MA 02115; and e Xiamen Amoytop Biotech Company, Ltd., 330 Wengjiao Road, Xiamen, Fujian, China 361022 1 S.M.A. and M.M. contributed equally to this work. Edited by Peter Cresswell, Yale University School of Medicine, New Haven, CT, and approved October 2, 2009 (received for review August 3, 2009) Abstract Induction of effective antibody responses against HIV-1 infection remains an elusive goal for vaccine development. Progress may require in-depth understanding of the molecular mechanisms of neutralization by monoclonal antibodies. We have analyzed the molecular actions of two rare, broadly neutralizing, human monoclonal antibodies, 4E10 and 2F5, which target the transiently exposed epitopes in the membrane proximal external region (MPER) of HIV-1 gp41 envelope during viral entry. Both have long CDR H3 loops with a hydrophobic surface facing away from the peptide epitope. We find that the hydrophobic residues of 4E10 mediate a reversible attachment to the viral membrane and that they are essential for neutralization, but not for interaction with gp41. We propose that these antibodies associate with the viral membrane in a required first step and are thereby poised to capture the transient gp41 fusion intermediate. These results bear directly on strategies for rational design of HIV-1 envelope immunogens.
个人分类: 传染病学|2025 次阅读|0 个评论
如何正确地从抗体水平诊断是否感染疫病
qzxmsy 2009-11-5 23:41
抗体产生的四种途径 母源抗体 免疫制剂：抗毒素、抗血清、免疫球蛋白 疫苗免疫 野毒感染
个人分类: 未分类|23 次阅读|0 个评论
Affinity, avidity and specificity of antibody--《Immunohistochemistry》
yjh263 2009-10-28 22:35
Affinity （亲和力） : the strength of binding of one epitope to a monovalent antibody, such as Fab fragment, and is expressed in terms of the association constant, Ka . 亲和力 为一个抗原表位与单价抗体结合的能力，用 Ka 表示 (M -1 ,1/moles per liter) ，值越大表示亲和力越大，可高达 10 12 M -1 。室温时，大部分抗原抗体相互作用可于 1h 内达到平衡，但在 4 度时却要更长时间（ over night ）才能达到平衡。 Avidity （亲合力） ： a measure of the contribution of multivalent interactions to the stability of the antigen-antibody complex. 一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。 区别联系 ： 低 affinity （亲和力） 的抗体也许不适合进行 免疫沉淀 ，但往往可以于 免疫组化 实验中得到很好的结果，这正是由于其高 Avidity （亲合力）。 然而与蛋白的 低 affinity （亲和力） 交叉 反应也可在免疫组化技术中造成许多麻烦。 Specificity( 特异性 ) ： 由于抗体识别抗体相对较小的区域，故由于抗原分子之间结构有相关性的话，抗体偶尔识别其它抗原的现象也就不奇怪了。免疫组化不容易验证抗体的特异性，一般要用 IP 或 WB 来验证。 下面用一表来描述特异性在各种免疫化学反应中的区别： 技术 交叉反应 注意事项 评 价 免疫染色 普遍 较难识别，因为证实抗原一致性的辅助方法有困难 两个无关抗体的对照很重要 免疫沉淀 偶尔 区别交叉反应和相关性很重要 需设立好的对照 免疫印迹 普遍 容易识别，因为根据抗原分子的大小可鉴定 免疫亲和纯化 偶尔 应该避免使用交叉反应抗体 上表引自： http://www.uscnlife.cn/web/page/news5927.htm
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美国科学家最新发现“止血抗体”的查新信息分析与知识发现
xupeiyang 2009-10-27 16:19
http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2009/10/224489.shtm 查新信息分析和知识发现结论： 经检索1966 - 2009年的美国PUBMED数据库和欧洲EMBESE数据库，检索到相关文献6篇，未检索到与该课题的研究内容相同的文献报道。Extracellular histones are major mediators of death in sepsis的研究成果具有新颖性。与该研究课题相关的100篇文献（PUBMED数据库）计量分析可以看出文献的国家、城市、作者、期刊、年代和研究主题的分布情况（见信息分析报告）；还可以看到研究的历史演变和趋势（见GOPUBMED信息分析平台）。对Extracellular histones与 sepsis进行知识发现分析，发现211个主题（关键词）具有相关性，可以作为科研的参考。 科学家发现止血抗体 可有效控制外伤所致内出血 美国研究人员发现一种抗体，可有效控制由外伤导致的严重内出血。它有望为挽救在车祸、枪击等事件中受伤人员的生命提供新途径。 组蛋白毒性 俄克拉何马医学研究基金会一个研究小组发现，外伤导致大出血主要由名为组蛋白的蛋白质破坏血管组织膜造成，新发现的特殊抗体可抑制组蛋白破坏作用，控制内出血。 研究人员发现组蛋白在患败血症老鼠的血液中含量很高，并在随后对灵长类动物和人类的研究中发现同样事实。 组蛋白一般存在于细胞核中，环绕脱氧核糖核酸（DNA）并起到维持DNA双螺旋形态的重要作用。但是，当细胞由于外伤或疾病受损，原本位于细胞核中的组蛋白就会释放到血液中，吞噬血管组织膜，造成血管损伤。 研究小组认为，这导致内出血和身体组织中体液聚积，威胁生命。 研究带头人、心血管生物学家查尔斯埃斯蒙说：当意识到组蛋白的毒性时，我们立刻投入到寻找阻止它们破坏性作用（的物质）的工作中去。 研究报告10月25日发表于《自然医学》（ Nature Medicine ）杂志网络版。 老鼠有抗体 这种可抗阻组蛋白的特殊抗体被称为单克隆抗体，由美国天普大学研究人员马克莫内斯蒂耶发现。 单克隆抗体最早在一只患有自身免疫病的老鼠体内发现。在患有自身免疫病的患者体内也已发现单克隆抗体，但目前尚不清楚为何这些患者细胞核内会有这种抗体存在。 研究人员在患有败血症的老鼠身上试验单克隆抗体，结果显示抗体确实能阻止组蛋白的毒副作用，老鼠恢复健康。 埃斯蒙说，所有哺乳动物体内的组蛋白类似，因为它们是身体的基本组成部分。因此，老鼠体内的单克隆抗体对人类应同样有效。下一步研究将针对灵长类动物和人类。 止血防衰竭 对因简易炸弹袭击受伤的士兵、枪击受害者和忍受外伤痛苦的患者而言，这一发现为救治他们打开了一扇新门，埃斯蒙说，当患者大出血时，单克隆抗体能防止多器官衰竭。 埃斯蒙认为组蛋白的存在可以看作进化过程中的适应表现。 数百万年前，人和动物生病后，并非死于心脏病或车祸，而是死于传染病他说，我们相信细胞核中的组蛋白正是免疫系统最后一道防线。 俄克拉何马医学研究基金会主席斯蒂芬普雷斯科特说，遭受一处外伤的患者往往还要遭受多次致命性继发损伤，单克隆抗体的发现同时给人们研究这一问题提供了线索。 如果能搞清楚如何控制初次损伤，或许就能阻止经常随后产生的多米诺效应，他说。 更多阅读 《自然医学》发表论文摘要（英文） http://www.nature.com/nm/journal/vaop/ncurrent/abs/nm.2053.html Nature Medicine Published online: 25 October 2009 | :10.1038/nm.2053 :10.1038/nm.2053 Extracellular histones are major mediators of death in sepsis Jun Xu 1 , Xiaomei Zhang 2 , Rosana Pelayo 3 , Marc Monestier 4 , Concetta T Ammollo 1 , Fabrizio Semeraro 1 , Fletcher B Taylor 1 , Naomi L Esmon 1 , Florea Lupu 1 Charles T Esmon 1 , 2 Abstract Hyperinflammatory responses can lead to a variety of diseases, including sepsis 1 . We now report that extracellular histones released in response to inflammatory challenge contribute to endothelial dysfunction, organ failure and death during sepsis. They can be targeted pharmacologically by antibody to histone or by activated protein C (APC). Antibody to histone reduced the mortality of mice in lipopolysaccharide (LPS), tumor necrosis factor (TNF) or cecal ligation and puncture models of sepsis. Extracellular histones are cytotoxic toward endothelium in vitro and are lethal in mice. In vivo , histone administration resulted in neutrophil margination, vacuolated endothelium, intra-alveolar hemorrhage and macro- and microvascular thrombosis. We detected histone in the circulation of baboons challenged with Escherichia coli , and the increase in histone levels was accompanied by the onset of renal dysfunction. APC cleaves histones and reduces their cytotoxicity. Co-infusion of APC with E. coli in baboons or histones in mice prevented lethality. Blockade of protein C activation exacerbated sublethal LPS challenge into lethality, which was reversed by treatment with antibody to histone. We conclude that extracellular histones are potential molecular targets for therapeutics for sepsis and other inflammatory diseases. Top of page Cardiovascular Biology Research Program, Oklahoma Medical Research Foundation, Oklahoma City, Oklahoma, USA. Howard Hughes Medical Institute, Oklahoma City, Oklahoma, USA. Immunology and Cancer Research Program, Oklahoma Medical Research Foundation, Oklahoma City, Oklahoma, USA. Temple Autoimmunity Center, Department of Microbiology and Immunology, Temple University School of Medicine, Philadelphia, Pennsylvania, USA. http://www.embase.com/search/results Neutrophil-derived circulating free DNA (CF-DNA/NETs): A potential prognostic marker for posttraumatic development of inflammatory second hit and sepsis Margraf S. , Lgters T. , Reipen J. , Altrichter J. , Scholz M. and Windolf J. Shock 2008 30 :4 (352-358) Go to publisher for the full text The release of neutrophil extracellular traps (NETs) has been identified as a novel immune response in innate immunity. Neutrophil extracellular traps are composed of neutrophil-derived circulating free DNA (cf-DNA), histones , and neutrophil cytoplasm-derived proteins such as proteases. Here, we studied the putative predictive value of plasma cf-DNA/NETs for the development of sepsis and mortality after multiple trauma. In a prospective pilot study with 45 multiple trauma (Injury Severity Score 16) patients, cf-DNA was directly quantified in plasma. Blood samples were sequentially obtained daily from admission to our Trauma Center until day 10. Because of limited intensive care unit (ICU) stay of less than 3 days, 8 patients have been excluded, resulting in 37 patients that were evaluated. Time kinetics of cf-DNA/NETs was compared with C-reactive protein (CRP), interleukin (IL) 6, leukocyte counts, and myeloperoxidase. The severity of the injury was calculated on the basis of the Injury Severity Score, as well as Multiple Organ Dysfunction Score, Sequential Organ Failure Assessment, and Simplified Acute Physiology Score II on ICU. Initially high cf-DNA/NETs values (800 ng/mL) with recurrent increased values between days 5 to 9 were associated with subsequent sepsis , multiple organ failure, and death . In conjunction with cf-DNA/NETs, IL-6 was significantly elevated after admission. However, the development of a second hit was not indicated by IL-6. In contrast to cf-DNA/NETs, no difference in CRP kinetics was observed between patients with and without development of sepsis . Circulating free DNA/NETs kinetics rather followed kinetics of Multiple Organ Dysfunction Score, Sepsis -related Organ Failure Assessment, leukocyte counts, and partially of myeloperoxidase. Circulating free DNA/NETs seems to be a valuable additional marker for the calculation of injury severity and/or prediction of inflammatory second hit on ICU. However, a large clinical trial with severely injured patients should confirm the prognostic value of neutrophil-derived cf-DNA/NETs. Copyright 2008 by the Shock Society. Associated Links Drug Index Terms C reactive protein (endogenous compound), DNA (endogenous compound), interleukin 6 (endogenous compound), myeloperoxidase (endogenous compound) Non-drug Index Terms adolescent , adult , aged , article , clinical article , controlled study , enzyme kinetics , female , hospitalization , human , inflammation , injury scale , intensive care unit , leukocyte count , male , mortality , multiple trauma , neutrophil , prognosis , sepsis Author Keywords Inflammation, Multiple organ failure, Multiple trauma, NETs, Neutrophils, SIRS Correspondence Address Scholz M. : Klinik fr Unfall- und Handchirurgie, Heinrich-Heine-Universitt Moorenstr. 5 , 40225 Dsseldorf , Germany . Author Addresses Margraf S. : Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Johann Wolfgang Goethe University , Frankfurt am Main , Germany . Lgters T. , Reipen J. , Altrichter J. , Scholz M. , Windolf J. : Department of Trauma and Hand Surgery, Heinrich-Heine University , Dsseldorf , Germany . Scholz M. : Klinik fr Unfall- und Handchirurgie, Heinrich-Heine-Universitt Moorenstr. 5 , 40225 Dsseldorf , Germany . Copyright MEDLINE is the source for part of the citation data of this record Additional Information Abbreviated Journal Title Shock ISSN 10732322 CODEN SAGUA Source Type Journal Source Publication Date October 2008 Item Type Article Pages 352-358 Country of Author Germany Country of Source United States Language of Article English Language of Summary English MEDLINE PMID 18317404 EMBASE Accession Number 2008488897 Number of References 35 Cited by in Scopus 5 CAS Registry Numbers C reactive protein ( 9007-41-4 ) DNA ( 9007-49-2 ) Back to results Record 2 Related Articles | Add to Clipboard | Email Record Beneficial suicide: Why neutrophils die to make NETs Brinkmann V. and Zychlinsky A. Nature Reviews Microbiology 2007 5 :8 (577-582) Go to publisher for the full text Neutrophils are one of the main types of effector cell in the innate immune system and were first shown to effectively kill microorganisms by phagocytosis more than 100 years ago. Recently, however, it has been found that stimulated neutrophils can also produce extracellular structures called neutrophil extracellular traps (NETs) that capture and kill microorganisms. This Progress article gives an overview of the structure, function and generation of NETs, and their role in infections. Associated Links Drug Index Terms deoxyribonuclease (endogenous compound), histone (endogenous compound), histone H2A (endogenous compound), hydrogen peroxide (endogenous compound), protein kinase C (endogenous compound), reactive oxygen metabolite (endogenous compound), reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase (endogenous compound) Non-drug Index Terms antimicrobial activity , article , bacterial virulence , cell death , chemical structure , chromatin , chronic granulomatous disease , fertilization , fungus , Gram negative bacterium , Gram positive bacterium , granulocyte , human , infection control , innate immunity , intracellular killing , necrotizing fasciitis , neutrophil , neutrophil chemotaxis , nonhuman , phagocytosis , preeclampsia , priority journal , sepsis , Streptococcus pneumoniae Correspondence Address Brinkmann V. : Microscopy Core Facility, Max Planck Institute for Infection Biology Charitplatz 1 , 10117 Berlin , Germany . Author Addresses Brinkmann V. : Microscopy Core Facility, Max Planck Institute for Infection Biology, Charitplatz 1 , 10117 Berlin , Germany . Zychlinsky A. : Department of Cellular Microbiology, Max Planck Institute for Infection Biology Charitplatz 1 , 10117 Berlin , Germany . Copyright MEDLINE is the source for part of the citation data of this record Additional Information Abbreviated Journal Title Nat. Rev. Microbiol. ISSN 17401526 CODEN NRMAC Source Type Journal Source Publication Date August 2007 Item Type Article Pages 577-582 Country of Author Germany Country of Source United Kingdom Language of Article English Language of Summary English Publisher Item Identifier NRMICRO1710 MEDLINE PMID 17632569 EMBASE Accession Number 2007348090 Number of References 39 Cited by in Scopus 33 CAS Registry Numbers deoxyribonuclease ( 37211-67-9 ) histone ( 9062-68-4 ) hydrogen peroxide ( 7722-84-1 ) protein kinase C ( 141436-78-4 ) reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase ( 9032-22-8 ) http://www.gopubmed.org/web/gopubmed/1?WEB01wpyt85j5itedI5bI1I00f01000j10040001rl Title: Extracellular histones are major mediators of death in sepsis . PMID: 19855397 Related Articles Authors: Xu, J , Zhang, X , Pelayo, R , Monestier, M , Ammollo, C T , Semeraro, F , Taylor, F B , Esmon, N L , Lupu, F , Esmon, C T Journal: Nat Med , 2009 Abstract: Hyperinflammatory responses can lead to a variety of diseases, including sepsis . We now report that extracellular histones released in response to inflammatory challenge contribute to endothelial dysfunction, organ failure and death during sepsis . They can be targeted pharmacologically by antibody to histone or by activated protein C ( APC ). Antibody to histone reduced the mortality of mice in lipopolysaccharide (LPS), tumor necrosis factor ( TNF ) or cecal ligation and puncture models of sepsis . Extracellular histones are cytotoxic toward endothelium in vitro and are lethal in mice. In vivo, histone administration resulted in neutrophil margination, vacuolated endothelium, intra-alveolar hemorrhage and macro- and microvascular thrombosis. We detected histone in the circulation of baboons challenged with Escherichia coli, and the increase in histone levels was accompanied by the onset of renal dysfunction. APC cleaves histones and reduces their cytotoxicity. Co-infusion of APC with E. coli in baboons or histones in mice prevented lethality. Blockade of protein C activation exacerbated sublethal LPS challenge into lethality, which was reversed by treatment with antibody to histone. We conclude that extracellular histones are potential molecular targets for therapeutics for sepsis and other inflammatory diseases. Affiliation: Cardiovascular Biology Research Program, Oklahoma Medical Research Foundation, Oklahoma City , Oklahoma , USA . Wikipedia: Age-specific death rate , Antibodies , Baboon , Benign neoplasm , Bleeding , Blood poisoning , Cancer , Case fatality rate , DAEC , Death Rate , Death rates , EAEC , EIEC , E Coli , Endothelium , Enteroinvasive Escherichia coli , Escherichia , Escherichia Coli , Hemorrhage , Histone , Histone H1 , Histone H3 , Histone H4 , Histone H5 , House Mouse , House mice , Laboratory mice , Laboratory mouse , Ligation , Ligature , Lipopolysaccharides , Mice , Mortality , Mouse , Mus , Mus domesticus , Mus musculus , Mus musculus domesticus , Necrosis , Neoplasm , Neutrophil , Papio , Polymorphonuclear leukocyte , Protein C , Proteins , Puncture , Savanna Baboon , Sepsis , Septicemia , Severe sepsis , Therapeutic , Thrombosis , Thrombus , Treatment , Tumor , Tumor necrosis factors , Vacuole Title: Hepatitis B virus replication is regulated by the acetylation status of hepatitis B virus cccDNA-bound H3 and H4 histones . PMID: 16530522 Related Articles Authors: Pollicino, T , Belloni, L , Raffa, G , Pediconi, N , Squadrito, G , Raimondo, G , Levrero, M Journal: Gastroenterology , Vol. 130 (3): 823-37 , 2006 Abstract: BACKGROUND AIMS: HBV covalently closed circular DNA (cccDNA), the replicative intermediate responsible for persistent HBV infection of hepatocytes, is the template for transcription of all viral mRNAs. Nuclear cccDNA accumulates as a stable episome organized into minichromosomes by histone and nonhistone proteins. In this study we investigated, by a newly developed sensitive and specific assay, the relationship between viral replication and HBV chromatin assembly, transcription, and interaction with viral and cellular regulatory proteins. METHODS: To achieve this aim we coupled a quantitative chromatin immunoprecipitation (ChIP) technique to an established method that allows the amplification of virion-encapsidated HBV genomes after transfection of linear HBV DNA into human hepatoma HuH7 cells. The cccDNA-ChIP technique was also applied to study HBV minichromosome transcriptional regulation in liver tissue from HBV-infected patients. RESULTS: The use of anti-acetyl- H4 /-H3 specific antibodies to immunoprecipitate transcriptionally active chromatin revealed that HBV replication is regulated by the acetylation status of the cccDNA-bound H3/ H4 histones . Class I histone deacetylases inhibitors induced an evident increase of both cccDNA-bound acetylated H4 and HBV replication. Finally, histones hypoacetylation and histone deacetylase 1 recruitment onto the cccDNA in liver tissue correlated with low HBV viremia in hepatitis B patients. CONCLUSIONS: We developed a ChIP-based assay to analyze, in vitro and ex vivo, the transcriptional regulation of HBV cccDNA minichromosome. Our results provide new insights on the regulation of HBV replication and identify the enzymatic activities that modulate the acetylation of cccDNA-bound histones as new therapeutic targets for anti-HBV drugs. Affiliation: Laboratory of Gene Expression, Fondazione A. Cesalpino, University of Rome La Sapienza, Rome , Italy . Pubmed MeSH: Adult , Aged , DNA, Viral , Enzyme Inhibitors , Hepatitis B, Chronic , Humans , Middle Aged Wikipedia: Acetylation , Animal virus , Antibodies , B-DNA , B virus , Carcinoma, hepatocellular , Cercopithecine herpesvirus 1 , Chromatin , Circular DNA , Client , Co-immunoprecipitation , DNA , Deoxyribonucleic Acid , Double-stranded DNA , Drugs , Episome , Genome , Genomics , Hepatitis , Hepatitis B , Hepatitis B Virus , Hepatitis virus , Hepatocellular carcinoma , Hepatocyte , Hepatoma , Herpes B Virus , Herpesvirus simiae , Histone , Histone H1 , Histone H3 , Histone H4 , Histone H5 , Histone deacetylase , Immunoprecipitation , Liver cells , Messenger RNA , Monkey B virus , Patient , Plasmid , Poly(A) tail , Proteins , Therapeutic , Tissue , Transfection , Treatment , Viremia , Virus Title: Susceptibility to programmed cell death in T-lymphocytes from septic patients: a mechanism for lymphopenia and Th2 predominance. PMID: 12927795 Related Articles Authors: Roth, G A , Moser, B , Krenn, C G , Brunner, M , Haisjackl, M , Almer, G , Gerlitz, S , Wolner, E , Boltz-Nitulescu, G , Ankersmit, H J Journal: Biochem Biophys Res Commun , Vol. 308 (4): 840-6 , 2003 Abstract: Sepsis causes lymphopenia which is inversely correlated with patient survival. The role of apoptosis-specific immune-activation and activation-induced cell-death in sepsis is incompletely understood. Fifteen septic patients and 20 healthy controls were included. T-cell proliferation was measured by thymidine uptake. Apoptosis and cell phenotype were determined by FACS. sTNFR1, sCD95, interleukin-1beta converting enzyme (sICE), and interleukin (IL)-10 were measured by ELISA. PHA and CD3-driven T-cell proliferation were significantly decreased in septic patients. The percentages of CD3(+) and CD4(+) T cells and CD19 (+) B cells were significantly reduced. Percent memory T-cells (CD45RO(+)) and cells undergoing apoptosis (CD95(+)/ annexin-V (+)) were significantly increased in sepsis . Moreover, sCD95, sTNFRI, and ICE were significantly increased. Anti-CD3 antibody triggering induced a 56% increase of CD4 T-cell death in septic patients vs. 7.5% in controls relative to IgG. Serum level of IL-10 , a Th2 cytokine, was enhanced. These findings strongly suggest that in septic patients Th1 T-cells are selectively susceptible to undergo apoptosis. This observation provides an additional pathophysiological concept in the genesis of Th2 dominance. Affiliation: Department of Surgery, General Hospital of Vienna Medical School, Vienna , Austria . Pubmed MeSH: Adult , Aged , Annexin A5 , Antigens, CD19 , Antigens, CD3 , Antigens, CD45 , Antigens, CD95 , Cell Division , Cell Separation , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Flow Cytometry , Histones , Humans , Interferon Type II , Interleukin-10 , Middle Aged , Th2 Cells Wikipedia: Antibodies , Apoptosis , B-Cell , B-lymphocyte , B Cells , B Lymphocytes , Blood Serum , Blood poisoning , Cell death , Client , Cytokines , Enzymes , IgG , IgG1 , IgG2 , IgG3 , IgG4 , Immunoglobulin G , Interleukin , Lymphocytopenia , Lymphopenia , Patient , Phenotype , Sepsis , Septicemia , Serum , Severe sepsis , T-Cell , T-lymphocyte , T Lymphocytes , T cells Title: The Felty syndrome: a case-matched study of clinical manifestations and outcome, serologic features, and immunogenetic associations. PMID: 1969604 Related Articles Authors: Campion, G V , Maddison, P J , Goulding, N J , James, I E , Ahern, M J , Watt, I S , Sansom, D M Journal: Medicine (Baltimore) , Vol. 69 (2): 69-80 , 1990 Abstract: Thirty-two patients with the Felty syndrome, defined by the presence of rheumatoid arthritis, splenomegaly, and neutropenia, have been studied in comparison with 32 patients with rheumatoid arthritis matched for age, sex, and disease duration, and 9 patients with rheumatoid arthritis and idiopathic neutropenia. Patients with the Felty syndrome had severe destructive arthritis, which progressed during follow-up despite little evidence of objective synovitis, and a higher frequency of extra-articular manifestations, including vasculitis. Bacterial infection tended to occur in patients with the lowest neutrophil count but continued to occur in some despite normalization of the WBC. Prognosis was poor and 8 deaths occurred, predominantly from sepsis . Serologic features were prominent. High titers of IgG rheumatoid factor and circulating immune complexes characterized patients with persistent neutropenia. A family history of rheumatoid arthritis was more common in patients with the Felty syndrome. The association with HLA DR4 was very strong; in addition there was an increased frequency of the DQw3 variant, 3b, suggesting that HLA Class II genes in linkage with DR4 may contribute to disease expression. Affiliation: Bath Institute for Rheumatic Diseases, U.K . Pubmed MeSH: Adult , Antibodies , Antibodies, Antinuclear , Follow-Up Studies , HLA-DQ Antigens , HLA-DR Antigens , Histones , Humans , Polymorphism, Restriction Fragment Length Wikipedia: Angiitis , Antigen-antibody complex , Arthritis , Arthritis, rheumatoid , Bacterial Infections , Bacterial infection , Blood poisoning , Cistron , Class II gene , Client , Enlarged spleen , Felty's Syndrome , Felty syndrome , Gene , Genetic material , IgG , IgG1 , IgG2 , IgG3 , IgG4 , Immune complex , Immunity , Immunization , Immunogenetic , Immunoglobulin G , Neutropenia , Neutrophil , Patient , Polyarthritis , Polymorphonuclear leukocyte , Prognosis , Rheumatoid Arthritis , Rheumatoid factor , Sepsis , Septicemia , Severe sepsis , Splenomegaly , Syndrome , Synovitis , Variolation , Vasculitides , Vasculitis http://www.gopubmed.org/web/gopubmed/1?WEB01wpyt85j5itedI5kI1I00f01000j10040001rl statistics 1 2 Top Years Publications 2004 14 2009 9 2008 9 2001 7 2007 7 2002 6 2006 5 1996 5 1997 5 2005 5 1991 4 2003 4 2000 4 1995 3 1992 3 1998 3 1999 3 1990 1 1989 1 1993 1 1 2 1 2 3 ... 27 Top Authors Publications Taylor F 9 Remick D 6 Esmon C 5 Bolgos G 5 Newcomb D 3 Wollenberg G 3 Ferrell G 3 Jansen P 3 De Jong I 3 Hack C 3 Okajima K 3 Call D 2 Cunha F 2 Chang A 2 Catlett R 2 Zhang L 2 Chang A 2 Wang P 2 Chaudry I 2 Lee H 2 1 2 3 ... 27 1 2 3 ... 59 Top Terms Publications Sepsis 90 Animals 71 Tumor Necrosis Factor-alpha 64 Necrosis 64 Neoplasms 61 Mice 56 Lipopolysaccharides 53 Proteins 50 Cytokines 45 Mortality 44 Ligation 42 Punctures 40 Tumor Necrosis Factors 38 tnf-alpha 38 Escherichia coli 37 Wounds and Injuries 33 Escherichia 33 tnf 31 tumor necrosis factor 31 Neutrophils 30 1 2 3 ... 59 Top Countries Publications USA 29 Netherlands 3 France 2 South Korea 1 Turkey 1 Italy 1 Top Cities Publications Oklahoma City 5 Ann Arbor 4 Indianapolis 2 Boston 2 Bethesda 2 New Orleans 2 Amsterdam 2 Jinju 1 Philadelphia 1 Ankara 1 East Lansing 1 Lille 1 Seattle 1 Orlans 1 Chicago 1 Denver 1 Kansas City, KS, USA 1 Gainesville 1 Baltimore 1 Milan 1 1 2 Top Journals Publications Infect Immun 5 J Immunol 4 Shock 3 Blood 3 Surgery 2 Crit Care Med 2 J Trauma 2 Mol Pharmacol 1 World J Surg 1 Maturitas 1 Plos One 1 J Pharmacol Exp Ther 1 J Lab Clin Med 1 Ann Surg 1 Jama-j Am Med Assoc 1 Am J Pathol 1 J Thromb Haemost 1 J Infect Dis 1 J Biol Chem 1 J Surg Res 1 1 2 http://arrowsmith.psych.uic.edu/cgi-bin/arrowsmith_uic/edit_b.cgi?refresh=TID=407 Start A-Literature C-Literature B-list Filter Literature A-query: Extracellular histones C-query: sepsis The B-list contains title words and phrases (terms) that appeared in both the A and the C literature. 2 articles appeared in both literatures and were not included in the process of computing the B-list but can be viewed here . The results of this search are saved under id # 407 and can be accessed from the start page after you leave this session. There are 1541 terms on the current B-list ( 211 are predicted to be relevant), which is shown ranked according to predicted relevance. The list can be further trimmed down using the filters listed in the left margin. To assess whether there appears to be a biologically significant relationship between the AB and BC literatures for specific B-terms, please select one or more B-terms and then click the button to view the corresponding AB and BC literatures. Use Ctrl to select multiple B-terms. Rank Prob B-term 10.98paclitaxel 20.97ubiquitin proteasome 30.97akt 40.97ubiquitin proteasome pathway 50.97fludarabine 60.96cox-2 70.96proteasome 80.96inflammatory cytokine 90.96c ebp 100.95mapk 110.95mitogen activated protein 120.95histone deacetylase inhibitor 130.95cyclooxygenase-2 140.95caspase-3 150.95enterococcus faecalis 160.94a2a receptor 170.94mkp-1 180.94lipopolysaccharide binding 190.94erk1 200.94ebp 210.94statin 220.93hcv 230.93role nitric oxide 240.93jnk 250.93stat5 260.93adenosine a2a receptor 270.93cytokine release 280.93extracellular signal regulated 290.92a2a 300.92il-8 310.92signal regulated kinase 320.92il-10 330.92microvascular endothelial cell 340.91microvascular endothelial 350.91cytarabine 360.91map kinase 370.91endothelin-1 380.91tyk2 390.90kinase signaling 400.90nf kappab 410.90endothelial cell apoptosis 420.90vegf 430.90extracellular trap 440.89caspase-3 activation 450.89serum amyloid 460.89neutrophil extracellular trap 470.88histone deacetylase 480.88protein kinase pathway 490.88nitric oxide synthase 500.88activated protein kinase 510.88regulated kinase 520.87extracellular signal 530.87human cytomegalovirus 540.87kinase pathway 550.87ubiquitin 560.86assist device 570.86enterococcus 580.85olanzapine 590.85mapk activation 600.85protein kinase signaling 610.85ribosomal rna gene 620.84smad3 630.84nucleosome 640.84mapk pathway 650.84erk 660.83proteomic 670.83tnfalpha 680.82poly adp 690.82coactivator 700.82activated protein 710.81sp1 720.80interferon alfa 730.80neuronal nitric oxide 740.80matrix metalloproteinase 750.79anthrax 760.79metalloproteinase-9 770.78alfa 780.78nuclear factor 790.78small cell 800.77cyclooxygenase-2 cox-2 810.77il-10 promoter 820.77microarray analysis 830.77clozapine 840.77t helper 850.77celecoxib 860.77induce apoptosis human 870.76ap-1 nf kappab 880.76jun n terminal 890.76cardiomyocyte 900.76tyrosine phosphorylation 910.75rna gene 920.75matrix metalloproteinase-9 930.75human endothelial 940.75il-8 expression 950.74irf-2 960.74human endothelial cell 970.74c jun 980.74cytomegalovirus 990.74th2 1000.73feline leukemia virus 1010.72chromatin remodeling 1020.72transcriptional activation 1030.72ifn 1040.71cell apoptosis 1050.71feline leukemia 1060.71group a streptococcus 1070.70reactive oxygen 1080.70p300 1090.68leishmania major 1100.67stent 1110.66alfa therapy 1120.66n terminal kinase 1130.66liver transplantation 1140.66apoptosis human 1150.66chronic liver disease 1160.66mapk dependent 1170.65serine phosphorylation 1180.65oxidative stress 1190.64chronic liver 1200.64downregulation 1210.64surface protein 1220.64acute myelogenous leukemia 1230.63alternatively spliced human 1240.63a streptococcus 1250.63ap-1 1260.63apoptotic 1270.63cytokine 1280.63antimicrobial activity 1290.62taxol paclitaxel 1300.62transactivation 1310.61hepatocellular 1320.61kinase activation 1330.61kinase mitogen 1340.60alternatively 1350.60replicon 1360.60s6 kinase 1370.59interferon alfa therapy 1380.59mitogen 1390.59cyclin dependent 1400.59transactivation domain 1410.58valproic acid 1420.58nf 1430.58liver disease 1440.57transcriptional regulation 1450.57protein tyrosine kinase 1460.57apoptosis acute 1470.57rat hepatocyte culture 1480.57hiv 1490.56lupus nephritis 1500.56kappab 1510.56c fos 1520.55mek 1530.55kinase mitogen activated 1540.55pkc 1550.54protein kinase activation 1560.54anthrax lethal toxin 1570.54leukotriene b4 1580.53activation erk1 1590.52myeloid leukemia 1600.51fos c jun 1610.51erk signaling 1620.51neural stem cell 1630.51apoptosis 1640.51taxol 1650.51tissue inhibitor metalloproteinase 1660.51gene variant 1670.50hypertonic 1680.50antimicrobial agent 1690.50receptor expression 1700.50histone h1 1710.49biomarker 1720.49promyelocytic 1730.48transcriptional response 1740.48signal regulated protein 1750.48erk activation 1760.48signaling cascade 1770.47cell activation 1780.47metalloproteinase 1790.47down regulation 1800.47nuclear receptor 1810.47promoter region 1820.47renal injury 1830.47dendritic cell 1840.47proximal tubular epithelial 1850.46killing neutrophil 1860.46tissue inhibitor 1870.46erk phosphorylation 1880.46apoptosis induced 1890.45gene encoding 1900.45autophagy 1910.45natural killer 1920.45candida 1930.45dna methyltransferase inhibitor 1940.44aortic endothelium 1950.44innate immunity 1960.43transcription factor 1970.42factor gene 1980.42induced platelet 1990.42amyloid p component 2000.41microarray 2010.41heparan sulfate 2020.41glycogen synthase 2030.40timp-3 2040.40serum amyloid p 2050.40induce apoptosis 2060.40kinase mediate 2070.40streptococcus 2080.40rat mesangial cell 2090.39contractility 2100.39laminin 2110.39heat shock 2120.39src 2130.39kinase-1 2140.38myelogenous leukemia 2150.38host defense 2160.38glycohydrolase 2170.38gene expression 2180.37tyrosine kinase 2190.37mapk cascade 2200.37tnfalpha induced 2210.37expression pattern 2220.37leukotriene 2230.37density lipoprotein receptor 2240.37induced apoptosis 2250.37vitronectin 2260.37endothelium 2270.36antimicrobial 2280.36c fos c 2290.36colonic epithelial 2300.36stem cell 2310.36ifn beta 2320.35hepatocellular carcinoma 2330.35rna level 2340.35growth factor-1 2350.35histone 2360.35nitric oxide 2370.35mouse model 2380.35insulin growth factor-1 2390.34glucocorticoid 2400.33chlamydia 2410.33signal transduction pathway 2420.33lung epithelial 2430.33protein kinase a 2440.33lung epithelial cell 2450.33mesangial cell 2460.33basic fibroblast growth 2470.33differentially regulated 2480.33aortic 2490.33kinase signaling cascade 2500.32tubular epithelial cell 2510.32signal pathway 2520.32lung fibroblast 2530.32muscle glycogen 2540.32promoter methylation 2550.31shigella 2560.31polymerase 2570.31ribosomal rna 2580.31histone dna 2590.31transcriptional 2600.31myosin heavy chain 2610.31peritoneal 2620.30innate 2630.30vitamin d receptor 2640.30candida albican 2650.30microvascular 2660.29plasminogen 2670.29expression gene 2680.29myeloid 2690.29proapoptotic 2700.29cell cycle arrest 2710.29transplantation 2720.29cntf 2730.29dendritic 2740.29protein kinase c 2750.29jun 2760.28h3 2770.28synergistically 2780.27mitogenic activity 2790.27mycobacterium 2800.27signaling pathway 2810.27copd 2820.27spliced 2830.26platelet derived 2840.26mediated lysis 2850.26phagocyte 2860.26bronchial carcinoma 2870.26endothelial cell 2880.26stimulate protein 2890.25extracellular matrix 2900.25reactive oxygen species 2910.25therapy multiple 2920.25inducible 2930.25transcriptional induction 2940.25fibroblast growth factor 2950.24rat pineal gland 2960.24mek erk 2970.24induced cell death 2980.24transforming growth factor 2990.23immunoglobulin 3000.23dexamethasone 3010.23pkb 3020.23immediate early 3030.23expression induced 3040.22therapy multiple myeloma 3050.22injury induced 3060.22tat 3070.22shigella flexneri 3080.22xenograft 3090.22dependent protein kinase 3100.22acetylation 3110.22parp-1 3120.21myoblast 3130.21ldl 3140.21virus felv 3150.21ribosomal 3160.21keratinocyte 3170.20interferon 3180.20erk activity 3190.20dna binding 3200.20dna methylation 3210.20lethal toxin 3220.19growth factor beta 3230.19human lung epithelial 3240.19baculovirus 3250.19tumor angiogenesis 3260.19infection mycobacterium 3270.19chemotactic factor 3280.19zymosan 3290.18chemiluminescence 3300.18chronic myeloid leukemia 3310.18mesangial 3320.18mb 3330.18phorbol 3340.18na k atpase 3350.18autoimmunity 3360.18n methyl d-aspartate 3370.18selenomethionine 3380.18platelet derived growth 3390.18norepinephrine 3400.17proteoglycan 3410.17stem 3420.17nephritis 3430.17mouse macrophage 3440.17endothelial 3450.17escherichia 3460.17kinase not 3470.17gastric carcinoma 3480.17effect dexamethasone 3490.16chromatin remodelling 3500.16oxidative 3510.16sequestration 3520.16regulated protein 3530.15protein tyrosine 3540.15colonic epithelial cell 3550.15cell signaling 3560.15nad glycohydrolase 3570.15escherichia coli 3580.15thyroid hormone 3590.15regulated protein kinase 3600.15c2c12 3610.15rat cortical 3620.15oxide 3630.15kinase a 3640.14dependent protein 3650.14antinuclear 3660.14naturally infected 3670.14dnase 3680.14chromatin modification 3690.14chronic myeloid 3700.14coli 3710.14pyrophosphatase 3720.14kinase phosphatase 3730.14adhesion 3740.13lipopolysaccharide 3750.13suppress tumor 3760.13gene regulation 3770.13signal transduction 3780.13derived growth factor 3790.13nuclear protein 3800.13induced apoptotic 3810.13promoter a 3820.13glutamate uptake 3830.13control viral 3840.12biotinidase 3850.12induction mkp-1 3860.12patient systemic lupus 3870.12glioblastoma 3880.12metallothionein 3890.12translational 3900.12spontaneously 3910.12chemotactic 3920.12alpha chronic 3930.12rat peritoneal 3940.12bronchial epithelial 3950.12colonic 3960.12induced cytotoxicity 3970.12related gene 3980.12epidermal growth factor 3990.11trichostatin a 4000.11bacterial toxin 4010.11fos 4020.11cell regulate 4030.11platelet 4040.11osteosarcoma 4050.11immunity 4060.11phosphodiesterase 4070.11macrophage 4080.11histone protein 4090.11neuroprotective 4100.11subunit gene 4110.11integrin 4120.10microtubule 4130.10raw 4140.10clone 4150.10killer 4160.10vitamin d 4170.10multiple myeloma 4180.10leukemia 4190.10amyloid 4200.10selective inhibitor 4210.10erk pathway 4220.10response stress 4230.10necrosis 4240.10platelet surface 4250.10hcc 4260.10norepinephrine induced 4270.10neutrophil 4280.10dna damage 4290.09angiogenesis 4300.09heavy chain 4310.09retinoblastoma 4320.09rat hepatic 4330.09stably 4340.09viral 4350.09lymphocyte patient 4360.09opsonized 4370.08arsenite 4380.08down regulate 4390.08rat hepatocyte 4400.08kinase regulate 4410.08cell cycle progression 4420.08renal 4430.08assay cell 4440.08na k 4450.08shock 4460.08repression 4470.08mitogenic signal 4480.08pineal gland 4490.08repress 4500.08weight 4510.08bacteria 4520.08mitogenic 4530.08mycobacterium tuberculosis 4540.08matrix protein 4550.08methyltransferase 4560.07murine 4570.07leishmania 4580.07multiple signaling pathway 4590.07factor receptor 4600.07myocardium 4610.07pathogen 4620.07blood leukocyte 4630.07protein degradation 4640.07protein kinase 4650.07genomic 4660.07astrocyte 4670.07phorbol ester 4680.07leukocyte 4690.07proteinuria 4700.07effect interferon 4710.07pluripotent 4720.07potential role 4730.07promoter 4740.07cardiac 4750.07faecalis 4760.07density lipoprotein 4770.07cell death 4780.07replication 4790.07skeletal muscle 4800.07survival 4810.07p90 4820.07phagocytosis 4830.07human skeletal muscle 4840.07mapk ap-1 4850.07activation mapk 4860.07cell contact 4870.07assist 4880.07pro 4890.06myosin 4900.06mediate 4910.06eukaryotic 4920.06rna polymerase 4930.06gene expression human 4940.06lung 4950.06proximal tubular 4960.06h1 4970.06recombinant 4980.06lipoprotein 4990.06expression human 5000.06fold 5010.06thyroid 5020.06sodium butyrate 5030.06expression epithelial 5040.06glycogen 5050.06small interference rna 5060.06hepatocyte 5070.06gene rat 5080.06ligation 5090.06pig 5100.06h4 5110.05nanoparticle 5120.05transcription 5130.05insulin growth 5140.05specific gene expression 5150.05evolutionary 5160.05transporter 5170.05effect growth hormone 5180.05isoprenoid 5190.05lethal 5200.05low dose 5210.05hepatic 5220.05kidney 5230.05human lung 5240.05protein dna 5250.05alpha1 5260.05atpase 5270.05regulated gene 5280.05casein 5290.05apoptotic death 5300.05inflammatory 5310.05glomerular 5320.05gene transcription 5330.05implanted cardiac 5340.05factor-1 5350.05mek erk signaling 5360.04sodium channel 5370.04high throughput 5380.04regulation c 5390.04cell induction 5400.04low density lipoprotein 5410.04human recombinant 5420.04quercetin 5430.04defense 5440.04epigenetic 5450.04megakaryocyte 5460.04low density 5470.04cartilage 5480.04myofibroblastic 5490.04expression gene encoding 5500.04trend 5510.04target gene 5520.04smooth muscle cell 5530.04epigenetic regulation 5540.04calcium activated 5550.04oxygen 5560.04expression 5570.04cue 5580.04butyrate 5590.04recruitment 5600.04chromatin 5610.04hormone signaling 5620.04stimulating hormone 5630.04dexamethasone inhibit 5640.04protein phosphatase 5650.03response inflammatory stimuli 5660.03escape 5670.03death 5680.03protein rat 5690.03threonine 5700.03culture 5710.03cell adhesion 5720.03inflammation 5730.03bacterial 5740.03atherosclerosis 5750.03adp 5760.03mrna 5770.03progression 5780.03hepatoma 5790.03human platelet 5800.03induced cell 5810.03smooth muscle 5820.03reactive 5830.03device 5840.03onset 5850.03albican 5860.03suppress tumor growth 5870.03protein peptide 5880.03diabetes 5890.03exercise 5900.03expression a 5910.03porcine 5920.03coronary 5930.03new strategy 5940.03thyroidal 5950.03pituitary 5960.03cell surface receptor 5970.03differentially 5980.03rapidly 5990.03factor beta 6000.03schizophrenia 6010.03dephosphorylation 6020.03n methyl 6030.03tuberculosis 6040.03permeation 6050.03pancreatic cancer 6060.03feline 6070.02avian 6080.02hippocampal 6090.02muscle cell 6100.02oncogene 6110.02immunogenic 6120.02biochemical characterization 6130.02hydroxamic acid 6140.02assay 6150.02cocaine 6160.02smooth 6170.02oocyte 6180.02persistence 6190.02mammalian cell 6200.02clinically 6210.02alzheimer 6220.02gamma1 6230.0225-dihydroxyvitamin d 6240.02resistance 6250.02immune 6260.02group a 6270.02methylation 6280.02novel 6290.02kinase activity 6300.02killing 6310.02mycobacteria 6320.02human blood leukocyte 6330.02na 6340.02cell cycle 6350.02systemic lupus 6360.02gene expression induced 6370.02serine 6380.02rna 6390.02decrease 6400.02systemic lupus erythematosus 6410.02heat 6420.02cell inhibition 6430.02calcium dependent 6440.02regulation gene 6450.02pediatric 6460.02receptor mediated 6470.02growth factor receptor 6480.02hydrogen peroxide induced 6490.02n terminal 6500.02species 6510.02myeloma 6520.02binding protein 6530.02cytotoxicity 6540.02broad 6550.02melanoma 6560.02drug abuse 6570.02plasticity 6580.02liver 6590.02mice 6600.02nad 6610.02cell binding 6620.02regulator 6630.02related protein 6640.02novel histone 6650.02dose 6660.02activation 6670.02nonmuscle myosin 6680.02growth arrest 6690.021-mediated 6700.02signalling pathway 6710.02patient systemic 6720.02molecular mechanism 6730.02associated protein 6740.02nocturnal 6750.02induced down regulation 6760.02prolactin 6770.02inhibition rat 6780.01adult rat 6790.013t3-l1 6800.01dopamine 6810.01epidermal 6820.01lymphoid 6830.01purification 6840.01leukemia virus 6850.01leukocyte platelet 6860.01glycolytic enzyme 6870.01decarboxylase 6880.01tumor cell line 6890.01glutamate 6900.01anticancer 6910.01channel 6920.01weapon 6930.01cell shape 6940.01induce expression 6950.01gene induction 6960.01systemic 6970.01silencing 6980.01directly 6990.01relationship cell 7000.01modulate host 7010.01brain region 7020.01injury 7030.01domain 7040.01tyrosine 7050.01endogenous 7060.01moth 7070.01acetyltransferase 7080.01memory 7090.01bronchial 7100.01cell fate 7110.01thymus 7120.01confer 7130.01cell role 7140.01transcription mrna 7150.01mrna abundance 7160.01targeting 7170.01growth differentiation 7180.01peptide 7190.01mast cell 7200.01colon cancer 7210.01locus 7220.01growth hormone 7230.01carcinoma cell 7240.01increase 7250.01epithelial cell 7260.01naturally 7270.01map 7280.01collagen synthesis 7290.01molecule 7300.01protein 7310.01phase 7320.01independent 7330.01signaling 7340.01host cell 7350.01modulate 7360.01trap 7370.01reverse 7380.01alkaline phosphatase 7390.01inhibitory 7400.01chain gene 7410.01constitutive 7420.01yeast 7430.01virus 7440.01inhibitor 7450.01long lasting 7460.01dermal 7470.01cultured human 7480.01export 7490.01cold shock 7500.01animal model 7510.01molecular 7520.01role epigenetic 7530.01effect growth 7540.01fibroblast 7550.01profound 7560.01gastric 7570.01rat brain 7580.01cell growth 7590.01production 7600.01pancreatic 7610.01human placenta 7620.01role histone 7630.01liver cell 7640.01mammal 7650.01hydrogen peroxide 7660.01mitochondrial 7670.01protection 7680.01histamine 7690.01alpha 7700.01phospholipid 7710.01suppressor 7720.01acute 7730.01protein kinase activity 7740.01ras 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Activities Behaviors Anatomy Chemicals Drugs Concepts Ideas Devices Disorders Genes Molecular Sequences, and Gene Protein Names Geographic Areas Living Beings Objects Occupations Organizations Phenomena Physiology Procedures Keep B-terms that do not exist in the medical thesaurus Start A-Literature C-Literature B-list Filter Literature AB literature B-term BC literature Extracellular histones mitogen activated protein sepsis 1: Genomic instability and histone H3 phosphorylation induction by the Ras -mitogen activated protein kinase pathway in pancreatic cancer cells.2009 Add to clipboard 2: Chromatin modification of the trefoil factor 1 gene in human breast cancer cells by the Ras /mitogen-activated protein kinase pathway.2006 Add to clipboard 3: High throughput identification of potential Arabidopsis mitogen-activated protein kinases substrates.2005 Add to clipboard 4: Involvement of histone H3 (Ser10) phosphorylation in chromosome condensation without Cdc2 kinase and mitogen-activated protein kinase activation in pig oocytes.2004 Add to clipboard 1: Losartan prevents sepsis -induced acute lung injury and decreases activation of nuclear factor kappaB and mitogen-activated protein kinases.2009 Add to clipboard 2: Liver X receptor agonist GW3965 dose-dependently regulates lps-mediated liver injury and modulates posttranscriptional TNF-alpha production and p38 mitogen-activated protein kinase activation in liver macrophages.2009 Add to clipboard 3: Inhibition of Nuclear Factor-kappaB and p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Does Not Always Have Adverse Effects on Wound Healing.2009 Add to clipboard 4: Cytokine-induced epithelial permeability changes are regulated by the activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in cultured Caco-2 cells.2008 Add to clipboard job id # 407 started Tue Oct 27 06:20:47 2009 Max_citations: 50000 Stoplist: /var/www/html/arrowsmith_uic/data/stopwords_pubmed Ngram_max: 3 407 Search ARROWSMITH A A_query_raw: 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