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抗菌检测方法论: greenbz 2013-3-8 16:06; 毛洁红胡国华乔竞奇唐闵摘要：简述了国内外抗菌产品和抗菌剂的检测现状，比较了各种检测方法的异同、适用范围和局限性；重点针对部分抗菌剂和抗菌产品，列举了新开发的测试方法，以及这些方法的优缺点。关键词：检测抗菌剂新型方法前言随着工业的迅速发展和人民生活水平的提高 , 人们对环境和自我健康日益重视，特别是SARS和禽流感后，人们更加重视抗菌剂及抗菌产品的开发和研制。由于抗菌剂和抗菌产品的多样性，很难用统一的方法来评价其真实的抗菌效果。了解国内国际抗菌产品和杀菌剂的检测方法，有助于企业正确和科学评价产品抗菌性能，提高产品的竞争性。术语抑菌：防止或抑制微生物生长繁殖的作用；杀菌：杀死微生物营养体和繁殖体的作用；杀菌值（率）：菌和样品接触一定时间前后活菌对数值之差或菌减少百分比。抑菌值（率）：菌和标准样品及已处理的抗菌样品接触一定时间后的活菌对数值之差，或菌减少百分比； 1. 抗菌剂的检测 1.1 抗菌剂的分类抗菌剂：指能够在一定时间内，使某些微生物（细菌、真菌、酵母菌、藻类及病毒等）的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。抗菌剂大致分为有机抗菌剂和无机抗菌剂两大类 : 无机抗菌剂以银、锌、铜等为主原料，以无机填料为载体，制成无机抗菌剂，耐高温性能好；有有机抗菌剂以酯类、醇类、酚类为主要原料，耐高温性较低，一般在 200 ℃ 以下，个别为 300 ℃ ，杀菌时间短，偶有析出等现象。 1.2 抗菌剂的检测抗菌剂的检验方法也是有很多种，常见的评价方法为最小抑菌浓度（ MIC ）和最小杀菌浓度（ MBC ） 1.2.1 试管法优点：操作简单，对仪器没有太严格要求缺点：判断结果的人为因素大，不够精准，样品用量大；在消毒技术规范里面有介绍。将样品稀释成不同浓度，加入到无菌试管中，在每个试管中加入一定浓度的测试菌，培养一定时间后肉眼观察培养液的混浊情况，如果是澄清的，说明没有细菌的增长，即细菌的生长得到了抑制。然后将所有澄清管都分别划线在培养基表面，若无细菌生长，则说明测试的菌已经被杀灭。以此来判断该样品的最小杀菌浓度和最小抑菌浓度。样品 A 测试菌种金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 Con. MIC 6.25ppm C/C/C 3.12ppm C/C/T 1.56ppm T/T/T 0.78ppm T/T/T 样品 A 试管法 MIC 结果： 3.12ppm 1.2.2 96 孔板 - 酶标仪法优点：机器判读结果，精准度高，样品量少；缺点：对实验室仪器要求较高；可以根据不同的样品选择不同的方法，针对比较贵重的样品，或样品量少的情况，可以选用 96 孔板的方法，这个方法对样品的用量很少，最终的结果是用酶标仪来读取 OD 值，相对而言，比用肉眼观察澄清度来得更为精准。将样品稀释到测试起始浓度后进行用多通道移液枪移取到 96 孔板中，然后对样品依次进行对倍稀释，稀释结束后加入测试进行培养，培养后上酶标仪读取 OD 值，未生长的浓度点即为该样品 MIC 值；将所有未生长的浓度梯度孔划线分离于固体培养基上并培养，无菌落生长的浓度即为该样品的 MBC 值。 96- 孔板法样品 A ( 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 ) Con (ppm) Blank 6.25 3.12 1.56 0.78 Growth Control A 0.046 0.048 0.048 0.166 0.225 0.215 B 0.047 0.046 0.048 0.163 0.242 0.218 C 0.047 0.046 0.047 0.166 0.208 0.206 D 0.046 0.047 0.046 0.181 0.227 0.211 E 0.049 0.047 0.047 0.173 0.204 0.218 F 0.046 0.045 0.046 0.162 0.218 0.205 G 0.047 0.045 0.045 0.168 0.208 0.213 H 0.047 0.043 0.044 0.167 0.218 0.208 样品 A 96 孔板法 MIC 结果： 3.12ppm 比较上述两种方法： 1) 96 孔板法的样品用量仅为试管法的 1/6 。针对一些比较贵重的样品可选择 96 孔板的方法。 2) 96 孔板一块板上可同时操作 10 个浓度， 2 个对照样， 8 个平行，仪器读数，结果的准确度相比较试管法大大提高。 3. 抗菌产品的检测抗菌产品的检测一般分定性、定量和现场模拟等三种方法：定性方法：对产品的抗菌性能进行定性的判断，相对较笼统，操作简单。定量方法：对产品的抗菌性能进行定量的检测，给出产品的具体抑 / 杀菌参数，能更清楚地了解产品的抗菌性能，可表示为产品的杀菌率（ % ），杀菌活性值 ( 对数减少值 ) 等。现场模拟实验法：模拟产品的真实使用情况来评估其抗菌的功能。抗菌产品根据应用领域的不同大致可以分成几大类：纺织品、高分子塑料产品、日化卫生用品和消毒剂和涂料等。针对不同的产品类型国际和国内都有不少相应的检测方法，如： 3.1 纺织品： AATCC100; AATCC147; AATCC30; JIS L 1902; EN ISO 20645; EN ISO 20743; EN 14119; GB/T 20944.1.2; GB 15979; FZ/T 62015; FZ/T 73023 等。 3.2 高分子塑料产品、涂料： ISO22196; JIS Z 2801; ISO 846; ASTM G21; QB/T 2591 等。 3.3 日化卫生用品和消毒剂： EN1500 ； EN1276; EN 1040; GB 15981 ； GB/T 19877.3 ；消毒技术规范等。 3.4 涂料 : USP 51; EP 5.1.3 ，做成涂片后也可参照塑料产品的检测方法进行评价。方法的不同直接导致测试的结果及评定的标准也将不同。 4. 抗菌产品的检测常见的评价方法主要有以下 2 种： 4.1 杀菌值（率） 4.2 抑菌值（率） 4.3 模拟评价法 4.1.1 杀菌率为抗菌产品接触一定数量污染菌后，在确定的时间内细菌减少百分比或细菌对数值减少级别。在这个实验中，接触时间的确定是很重要的，不同的接触时间可以得到不同的实验结果。接触时间可根据产品的用途来确定，例如消毒剂、洗手液，通常接触的时间仅为 1-10 分钟；抗菌纺织品，塑料制品建议的接触时间为 18-24 小时，许多材料无法提供细菌持续生长所需要的营养成分，污染菌在接触 24 小时后，细菌会发生自然衰亡的情况，所以实验中接触时间通常不超过 24 小时。 4.2.1 当细菌减少的数量不是和原始污染菌的浓度进行比较，而是和同材质没有抗菌处理的对照样品经过同样接触时间后残留的细菌数量进行比较时，反映的是产品的抑菌效果。抑菌值会随不同的测试对照品发生变化，对照品的选择对正确评价抑菌值有很关键的作用。 4.3.1 模拟法模拟法实验是模拟产品的实际使用环境、方法、程序，对产品的抗菌效果进行评价。此方法较为实际客观，特别是对 3.1-3.4 法不适用的产品所选者使用，例如气体状的杀菌产品，采用 3.1-3.4 的方法都无法对其进行评价，我们可以采用模拟法，人为制造一个污染空间，对产品使用前后的细菌数量进行检测，评价产品的杀菌值（率）。除此之外，对一些洗涤产品我们也可以模拟人皮进行测试，模拟人皮我们可以采用人造皮或动物皮替代，模拟我们的皮肤经过这些产品洗涤或消毒的过程，计算产品使用前后细菌减少。有一些实验还可以直接在受试者身上进行，例如 EN 1500-1997 《化学消毒剂和防腐剂擦手剂试验方法和要求》即采用的是真人的洗手过程，通过对一组 12-15 人洗手过程中，得到的杀菌率进行数学统计，最后得到产品的杀菌效果评价。在我们国家消毒技术规范消毒剂对手消毒模拟现场试验章节里有许多种，模拟法测试的介绍。企业可以根据自己对产品的需求进行选择。结论抗菌剂和抗菌产品抗菌性能测试的方法具有多样性，各种方法各有其优缺点。故在抗菌检测中须根据样品的各种特性来确定相应的检测方法，才能使得每个企业能对自己产品的抗菌 / 杀菌性能有正确的评价。参考文献： L. J. VINSON, E. L. AMBYE, A. G. BENNETT, W. C. SCHNEIDER, AND J. J. TRAVERS. In Vitro Tests for Measuring Antibacterial Activity of Toilet Soap and Detergent Bars. Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 50, No. 10 October 1961 消毒技术规范 ASTM E 1874-09 Sandard Test Method for Recovery of Microorganisms From skin using the cup scrub technique . Chemical Engineering Science, 1990, 45(8): 2219-2225. JIS L 1902:2002 Testing for antibacterial activity and efficacy on textile product; 个人分类: 文献资料|6192 次阅读|0 个评论

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