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2013年7月 FlowJo 南京行程安排: FlowJo 2013-7-8 11:48; 时间： 2013年7月10日，下午3:00 地点：南京大学汉口路校区，蒙民伟楼1901室内容： FlowJo流式数据分析 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo细胞周期分析; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|3035 次阅读|0 个评论

2013年6月 FlowJo 上海行程安排: 热度 1 FlowJo 2013-6-21 09:13; 时间单位地点 6 月 24 日 09:30 上海交通大学 Bio-X 中心交大闵行校区生物楼 1 号楼 1 楼会议室 6 月 24 日 13:30 中国科学院健康科学研究所重庆南路 225 号健康科学研究所 5 号楼 106 室 6 月 25 日 09:00 上海交通大学医学院附属新华医院 6 月 25 日 13:00 中科院上海生科院 6 月 26 日 09:00 上海市公共卫生临床中心上海市金山区漕廊公路 2901 号二楼会议室 6 月 27 日 09:00 上海市东方医院心脏医学部 6 月 27 日 14:00 上海生科院生物化学与细胞生物学研究所徐汇区岳阳路 320 号新生化大楼 809 会议室 6 月 28 日 09:30 中科院营养所 6 月 28 日 13:00 上海中医药大学; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|2940 次阅读|2 个评论

2013年6月 FlowJo 苏州/常州行程安排: FlowJo 2013-5-29 15:14; 2013年6月5日上午地点：苏州大学附属儿童医院内容：FlowJo流式数据分析 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo的常用功能 2013年6月5日下午地点：苏州大学生物医学研究院内容：FlowJo流式数据分析 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo的常用功能 2013年6月6日上午地点：苏州大学医学生物技术研究所内容：FlowJo流式数据分析 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo的常用功能 2013年6月7日下午地点：常州市第一人民医院内容：FlowJo流式数据分析 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo的常用功能; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|2684 次阅读|0 个评论

2013年5月 FlowJo 厦门&福州行程安排: FlowJo 2013-5-3 16:08; 2013年5月7日（全天）地点：厦门大学附属中山医院内容：FlowJo流式数据分析培训 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿 4. FlowJo周期分析 5. FlowJo的高级功能 2013年5月8日下午地点：福建医科大学内容：FlowJo流式数据分析讲座 1. FlowJo及流式数据介绍 2. FlowJo流式数据分析的流程 3. FlowJo软件荧光补偿; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|3011 次阅读|0 个评论

布局页中的图形编辑之二：添加文本框、绘制箭头等: FlowJo 2013-4-22 11:51; 布局页中的图形编辑之二：添加文本框、绘制箭头等作者：蔡何青，FlowJo技术专员在FlowJo的布局页里可以进行图形编辑，然后再导出高质量的用于发表文章的图片。为了使图片所表达的信息更直观，在导出图片之前，可能会需要对图片添加一些文本描述，绘制一些箭头或线条以说明图片之间的关联。这篇博文中将对这些操作进行介绍。例子：比较不同样本中NKG2C阳性群的百分比编辑之前：编辑之后：操作步骤： 1. 顶端对齐： 1.1 按住键盘CTRL键，单击，将三张图片同时选中；到布局编辑器的“排齐”菜单栏选择“Tops” 2. 图形定义窗口：双击图片，打开Graph Definition窗口 2.1 在Annotate选项卡中 2.1.1 去勾选ShowAnnotation：去除图片下方的Annotate注释 2.1.2 去勾选WithNames，勾选WithFrequencies：去除图片中所显示的细胞群的名称，只显示细胞群所占的百分比 2.1.3 在XAxis和YAxis中勾选HideLabel：去除图片自带的坐标轴的名称操作前后，图片的差别如下图所示： 2.2 在Fonts选项卡中将Graph中的字体大小选为18号，字体类型选为Bold进行加粗，字体颜色选为红色 3. 绘制线条或箭头 3.1 点击选中布局编辑器中的线条按钮，在布局页中绘制一条直线 3.2 双击已经绘制的直线，打开属性定义窗口 Arrow Style：选择箭头的类型，向前、向后或者是双箭头，本例中选择Forward Line Weight：选择线条的粗细，本例中选择的是Normal Line Style：选择线条的类型，实线、虚线等，本例中选择的是Solid Line Color：选择线条的严责，本例中为黑色 4. 添加文本框 4.1 点击选中布局编辑器中的文本框按钮，在布局页中绘制一个文本框 4.2 绘制完毕，软件自动打开文本框编辑器 4.3 在文本编辑栏中输入要添加的文本内容 4.4 在LineColor中将文本框的线条颜色选为白色，这样就不会显示文本框黑色的框架 4.5 根据需要，可以对字体的类型和文本框框架线条的类型进行选择导出图片：按照上述的操作步骤，便能得到本文中所示的编辑之后的图片；如何对图片进行导出，请参阅博文：如何在FlowJo中导出图片, 生成图片报告及导出高质量可发表的图片; 个人分类: FlowJo使用|14124 次阅读|0 个评论

布局页中的图形编辑之一：图形叠加: 热度 2 FlowJo 2013-4-22 11:18; 布局页中的图形编辑之一：图形叠加作者：蔡何青，FlowJo技术专员在FlowJo的布局页里可以进行图形叠加、添加文本注释、绘制线条或箭头、对图形的坐标轴进行重命名等操作，这篇博文中将对图形叠加部分进行详细介绍，其余的内容将在下一篇博文中介绍。一、直方图的两两叠加演示数据：来源于一个抗体滴定实验（CD8-FITC），Sample 1为空白对照，Sample 2-8中抗体浓度按2倍梯度稀释。目标：将每个样本的直方图分别与空白对照的直方图进行两两叠加步骤： 1. 设门分析完成之后，打开布局编辑器，将工作台中Sample 1的Lymphocytes节点拖进布局页，得到Sample 1的直方图 2. 如下图所示：将工作台中Sample 2的Lymphocytes节点拖到布局页中Sample 1的直方图上进行重叠 3. 重叠后如下图所示：左边为重叠的直方图，右边为图片的Legend ①左键单击Legend前的颜色条，可以更改直方图线条的颜色， ②右键单击Legend中的样本名称，在打开的下拉菜单中可进行多种操作： Coloring：Filled进行颜色填充，Tinted进行较浅的着色（本例中使用的为Tinted），None为不进行处理 LineStyle：更改线条的类型，包括实线和虚线等 LineWeight：更改线条的粗细 ③右上角的Batch批量处理按钮处于不可用状态 4. 如果要激活batch按钮，进行特殊批量处理的话，例如希望将所有的实验样本都分别与这个对照样本进行重叠，那么需要将重叠的图形中Sample 1定为对照样本，这样在批处理的时候所有的实验样本都分别与这个对照样本进行重叠；双击重叠后的直方图，在Specify选项卡中双击Sample 1，将其勾选设定为对照样本 5. 点击批量处理Batch按钮，进行批量处理，所有样本的直方图都分别于对照样本进行了重叠，如下图所示：二、多个直方图叠加演示数据：来源于一个抗体滴定实验（CD8-FITC），Sample 1为空白对照，Sample 2-8中抗体浓度按2倍梯度稀释。目标：将各个样本的直方图都与空白对照的直方图重叠在一起步骤： 1. 重复“直方图两两叠加”步骤里的步骤1和2的分析 2. 将工作台中Sample 3 - Sample 8样本的Lymphocytes节点都拖到布局页中Sample 1的直方图上进行重叠；或者，到工作台的“编辑”菜单栏中“选择同一层次的节点”，将所有的Lymphocytes节点都选中，再一起拖到布局页中的直方图上进行叠加，叠加之后得到的结果如下图所示： 3. 右键单击叠加之后的直方图，在下拉列表的“直方图”选项中可以进行“偏移”、“半偏移”、“立体偏移”和“重叠” 4. 各种偏移的结果如下图所示：三、以不同的颜色显示不同的细胞群目标：在CD4 vs. CD8的二维点图中，用不同的颜色显示CD8 T细胞群和CD4 T细胞群步骤： 1. 设门分析完成之后，打开布局编辑器，将工作台中D1样本的T Cells节点拖进布局页，得到CD4 vs. CD8的二维点图 2. 如下图所示，再分别将CD4 T Cells节点和CD8 T Cells节点拖到已有的二维点图上进行重叠 3. 重叠后的结果如下，分别用不同的颜色显示不同的细胞群; 个人分类: FlowJo使用|30172 次阅读|4 个评论

在FlowJo中给数据添加注释及更改坐标标注: 热度 1 FlowJo 2013-4-16 11:28; 在 FlowJo中给数据添加注释及更改坐标标注作者：蔡何青，FlowJo技术专员在流式细胞仪上采集数据的时候，一般都会对数据添加一些注释以便于分析及实验的备注。如果由于疏忽而没有添加必要的注释，可以在FlowJo中进行添加。一、修改荧光通道的标注：采集数据时一般都会对各个通道的参数进行标注。比如在一个三色实验中（FITC, PE, PerCP），对应的通道可以被标注为FL1 -FITC-CD3, FL2-PE-CD4,FL3-PerCP-CD8。如果没有进行标注，在软件中分析时则不能显示各荧光参数所对应的抗原。在FlowJo中可以重新进行标注，使其对应到相应的抗原具体操作步骤如下：下面的例子中，修改前图形窗口中显示情况如下图所示：X轴为APC-Ax700，Y轴为APC-H7 1. 到“Wrokspace”菜单栏中选择”Edit Columns”，打开如下窗口： 2. 在左侧的”All Column Values”列中向下拖动滚动条，找到对应的荧光参数。本例中CD4对应的是ACP-Ax700，CD8对应的是APC-H 3. 单击选中 ”Comp-APC-Ax700-A reagent” 和”Comp-APC-H7-A reagent” 4. 点击”Add Column”按钮将其添加到右侧的”Column To Play”列，点”OK”按钮确定， 5. 所选中的两个荧光参数及其标注被显示在工作台中，手动输入需要更改的标注，如下图所示：修改后图形窗口中显示情况如下图所示：X轴为CD4，Y轴为CD8 另外，如果你想要完全自定义坐标轴的话，可以将图片拖到布局页，在布局页中进行编辑，步骤如下： 1.将需要输出的图片拖到布局页 2.双击图片，在打开的图形定义窗口中选择“Annotate”选项卡，在“XAxis Label”中输入CD4，在“YAxis Label”中输入CD8 3. 修改后图形的坐标轴如下图所示：二、添加新的关键词对数据进行标注：在下面的例子中，数据在采集时的命名是从A1-A9，而不是根据数据的用途命名的。在FlowJo中，可以添加一个新的关键词，并命名为”Sample Name”，然后再输入相关的值，比如：control_1, condition_A。具体步骤如下： 1. 到”Workspace”菜单栏中选择”Add Keyword”，并给新添加的关键词命名为” Sample Name” 2. 点”OK”按钮确定，”Sample Name”关键词显示在工作台中，手动在列中输入各个数据对应的值，如下图：另外，你也可以删除任何添加的注释，其步骤如下： 1. 到“Wrokspace”菜单栏中选择”Edit Columns”，打开如下窗口： 2. 在右侧的“ColumnsTo Display”列中选中需要删除的“SampleName”关键词，点击“RemoveColumn”按钮，按“OK”键确认。工作台中的“SampleName”关键词列被删除，如下图所示：关键词还可以用于在布局页里面进行相对复杂的迭代批处理，一旦掌握这种使用方法，将会使你实验数据的批处理分析更加自动化，更加方便，为你节省大量的时间。这将在下一篇博文里详细讲解。; 个人分类: FlowJo使用|49806 次阅读|2 个评论

如何在FlowJo中导出图片, 生成图片报告及导出高质量可发表的图片: 热度 2 FlowJo 2013-4-15 14:08; 如何在FlowJo 中导出图片, 生成图片报告及导出高质量可发表的图片作者：蔡何青，FlowJo技术专员流式数据分析完毕之后，我们需要导出流式图片，用于学术报告及实验记录等，我将在这篇博文中说明如何在FlowJo里导出图片及生成图片报告，同时我也将在此讲解在FlowJo中怎样导出用于发表文章高质量的图片。一、FlowJo里的图片导出 1. 直接从图形窗口导出 1.1 在图形窗口的“文件”菜单栏中选择“另存为”或者“Export To App” 1.2 选择图片文件存放的路径，给文件重命名，以及更改图片格式备注：通常我们不是很建议用这种方式保存图片，一个原因是各个图片都要单个保存，非常的不方便，我们建议你采用在布局页里编辑再导出图片的方式。 2. 在布局页导出图片将需要导出的图片拖到布局页里进行导出，请参考第二部分内容（在FlowJo中生成报告）。 3. 在偏好设置中更改导出图片的格式 3.1 可导出的图片格式有6种：PNG,JPG, GIF, SVG, EMF, PDF 3.2 默认的图片格式为PNG，如果需要更改，到“编辑”菜单栏里选择“偏好设置文件格式”，在“布局编辑器”的输出格式类型中选择需要的格式，如下图所示二、在FlowJo 中生成报告 1. 在布局页生成报告的步骤： 1.1 打开布局编辑器：点击布局编辑器按钮，或者到“窗口”菜单栏里选择“打开布局编辑器” 1.2 在工作台中，单击选中需要输出的项目，并将其拖到布局编辑器 1.3 对布局编辑器中的图形进行排版：可以通过布局编辑器“排齐”菜单中的选项进行“顶端对齐”和“底端对齐”等操作 1.4 到布局编辑器“文件”菜单栏中选择“Scale To Page”，将所有图片都放到同一个页面里，避免出现分页的情况 1.5 保存并导出图片：点击“保存”按钮，或者到布局编辑器的“文件”菜单栏选择“图片另存为” 2. 布局页可生成报告的格式 2.1 点击Batch按钮进行批处理 2.2 可以将批处理的结果导出到FlowJo、PowerPoint、打印机、PDF文件、Web页面和Quicktime动画视频中三、生成高质量可发表图片的方法及建议建议将图片保存为PDF格式，再在专业的图片编辑器如Photoshop或者Illustrator里面进行编辑，再输出为杂志要求的文件格式，一般为JPG，现在也有杂志倾向于接收PDF图片。; 个人分类: FlowJo使用|64963 次阅读|3 个评论

在FlowJo10中调整流式图的坐标轴: FlowJo 2013-2-26 09:47; 在FlowJo10中调整流式图的坐标轴作者：蔡何青，FlowJo技术专员我们分析流式数据的目标之一是为了得到高质量的流式图。有时候一些数据的细胞压轴，我们需要对流式图的坐标轴进行调整，才能将所有细胞都呈现出来。在FlowJo10中可以灵活地调整流式图的坐标轴，这些调整包括： 1. 更换坐标轴的类型：Linear(线性), Logarithmic(对数), Logicle(双指数) (FlowJo中称为Biex) 2. 调整坐标轴的范围 3. 调整Biex坐标轴的有关参数：Extra Neg. Decades与Width Basis 对于调整流式图的坐标轴，我们经常遇到的一个疑问是：会不会是人为地更改了数据导致了数据呈现的更好？答案是否定的。更改流式图的坐标轴其实质是用不同刻度的坐标轴来显示数据，对原始数据的各项数值都没有做任何改动。首先，我们来看这三种类型的坐标轴： Linear：坐标轴的刻度是按照50K、100K、150K来标注的，是线性递增的；相当于下图中的linear方程（绿色直线） Logarithmic：坐标轴的刻度是按照100、101、102来标注的，是指数递增的；相当于下图中的exponential方程（黑色曲线）；坐标轴的刻度数值＞0，不能显示0及0以下的数据 Logicle (Biex)：能显示0及0以下的数据；是按照下图中的Logicle方程来标注刻度的，见下图中的红色曲线，在低位段（此图例中大约为Y轴的-25至+25位段）是以接近于linear方程（绿色直线）的形式来标注刻度，在高位段（此图例中大约为Y轴＜-25位段和＞25位段）是以接近于exponential方程（黑色曲线）的形式来标注刻度（图片引自：David R. Parks. 2006. A New "Logicle" Display Method Avoids Deceptive Effects of Logarithmic Scaling for Low Signals and Compensated Data. Cytometry Part A）那么，什么时候用哪种坐标轴呢？ Linear：散射光参数，如FSC和SSC Logarithmic：荧光参数， Logicle (Biex)：荧光参数，多色实验的荧光参数一般都要使用Logicle轴，因为荧光补偿之后会产生负值 FlowJo 10中的自定义参数轴窗口点击图形窗口界面的“T”按钮，选择“自定义参数轴”，打开自定义参数轴窗口，如下图所示： ①更换坐标轴的类型：Linear，Logarithmic，Biex ②手动输入坐标轴的范围，包括最大值和最小值 ③通过增加和减少按钮调整坐标轴的范围 ④当使用Biex坐标轴时，调整Extra Neg. Decades值的大小， ⑤当使用Biex坐标轴时，调整Width Basis值的大小（关于Extra Neg. Decades与Width Basis的详细解释，请参考博文《FlowJo应用常见问题及其解答》中的内容）应用实例——多色流式数据分析时调整某个荧光参数的坐标轴数据来源：Accuri C6采集的数据步骤： ①导入数据，设门分析后得到了CD4 vs. CD8的点图，如下图所示。对于补偿过的荧光参数，FlowJo 10会默认以Biex坐标轴来显示，而且软件自动对其Extra Neg. Decades与Width Basis值进行了调整 ②在下图中，我们能发现最右边的一群细胞有压轴的现象，而且软件也给出了提示：有一小部分细胞压在了X轴上，因此需要对Y轴坐标轴的范围进行调整 ③点击Y轴的T按钮，打开“自定义参数轴”窗口，将Extra Neg. Decades由默认的0调为1，再增加一段负的刻度段来将0以下的所有数据完全显示出来。操作如下图所示 ④点击“应用”按钮，得到结果如下图所示：原来压轴的数据完全显示出来了; 个人分类: FlowJo使用|77271 次阅读|0 个评论

Windows系统安装FlowJo v10 可能遇到的安装问题及解决方法: FlowJo 2013-1-28 10:10; Windows系统安装FlowJo v10 可能遇到的安装问题及解决方法作者：蔡何青，FlowJo技术专员我的电脑一直安装有多种FlowJo版本，每次新版本出来都会更新，以往用的都很好，没有任何冲突发生，直到最近一次更新中，由于重复的安装及卸载，在64位win7系统安装FlowJo10 时，在安装完成之后，提示“Error: Could not determine hardware address of your computer”，意思是无法判定电脑的硬件地址。也许有其它的用户有遇到相同的问题，以下是我的解决方法： 1. 清理一下Windows注册表， 2. 手动安装一下Visual C++ Libraries。具体操作步骤如下：一、安装FlowJo10 在FlowJo官方网站下载最新版本的FlowJo10并安装 http://www.flowjo.com/download/index.html 二、清理注册表 1. 备份原有注册表，防止误删：点击“开始”菜单，在程序搜索栏输入“regedit”（如下图所示），运行regedit.exe程序，到“文件”菜单栏选择“导出”，将原有注册表备份 2. 运用360安全卫士中的“注册表清理”功能，清除无效的注册表三、重新手动安装Visual C++ Libraries 1. 到Microsoft网站下载对应的Visual C++ Libraries，对应于64位系统的是Microsoft Visual C++ 2010 Redistributable Package (x64)，其下载地址如下： http://www.microsoft.com/en-us/download/details.aspx?id=14632 2. 清除原有的Visual C++ Libraries：运行vcredist_x64安装程序，在安装界面选择“Remove Microsoft Visual C++ 2010 x64 Redistributable from this computer”，点击Next直至卸载完成 3. 重新安装Visual C++ Libraries：运行vcredist_x64安装程序，勾选“I have read and accept the license terms.”，点击Next直至安装完成四、运行FlowJo10，插上Dongle或者输入购买的序列号，软件便可正常使用如有其它安装问题，请直接联系我们的热线支持电话400－680－5527，或者技术支持QQ群：32520162; 个人分类: FlowJo使用|28450 次阅读|0 个评论

线粒体膜电位检测细胞凋亡--JC-1流式应用的原理及分析: 热度 1 FlowJo 2013-1-24 09:46; JC-1 检测线粒体膜电位（Membrane potential）原理：在细胞凋亡的过程中往往伴随着线粒体跨膜电位的破坏，这被广泛认为是细胞凋亡过程中最早发生的事件之一。线粒体膜电位的检测有很多方法，JC-1的流式检测是比较常见的一种方法。 JC-1有单体和多聚体两种存在状态，低浓度时，以单体存在，可检测到绿色荧光，用流式检测时，通常为FL-1通道(和FITC同通道）高浓度时，以多聚体存在，可检测到红光，流式检测通常为FL-2通道（和PE同通道)。因JC-1浓度的变化,在单体和多聚体之间形成一个可逆的转变过程。正常细胞，膜电位正常时，JC-1通过线粒体膜极性进入线粒体内，并因浓度升高而形成发射红色荧光的多聚体，而凋亡细胞，线粒体跨膜电位去极化，JC-1从线粒体内释放，浓度降低，逆转为发射绿色荧光的单体形式。故而可以通过检测绿色和红色荧光来定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）的检测线粒体膜电位的变化。 JC-1 检测线粒体流式数据分析： 1.定性分析图1：图片来源：中国流式协会网站论坛图2：细胞经过药物不同时间点处理后，凋亡细胞逐渐增多，从原先的红光多聚体，慢慢的释放为绿光单体。图片来源： Journal of Translational Medicine 2011, 9:45 2.定量分析图3：图片来源： Leukemia(2012) 26, 451-460 欢迎共同讨论学习，如有问题，请联系博主或留言。; 个人分类: 流式知识|84131 次阅读|1 个评论

2013年1月 FlowJo 上海行程安排: FlowJo 2013-1-17 15:13; 2013年1月18日上午地点：上海罗氏制药有限公司内容：FlowJo流式数据分析 1. 数据分析理论讲解 2. FlowJo数据分析演示：数据分析流程、图形叠加、离线补偿、高级功能 3. 手把手操作指导 2013年1月18日 14:00 地点：上海睿智化学研究有限公司内容：FlowJo介绍与演示; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|3508 次阅读|0 个评论

FlowJo Dongle 的正确使用: FlowJo 2013-1-7 11:22; FlowJo Dongle 的正确使用作者：蔡何青，FlowJo 技术专员最近经常有用户反映由于误删了加密狗中的license.key文件，导致加密狗不能被FlowJo识别，无法使用软件的问题。出现这种情况，都是缘于对FlowJo Dongle的不正当使用。Dongle是一个非常精密的小东西，如果使用不当的话，会导致严重的后果，失去功能，无法正常使用软件，同时Dongle还有感染病毒的危险，更加麻烦。请大家在使用Dongle的时候，参考下面的正确使用方法，以免由于不正当使用给您带来不必要的麻烦。 Dongle的正确使用： 1. Dongle优盘的名称为FJTHUMB 2. Dongle优盘里必需有license.key文件，而且是除此文件之外没有其他文件 3. 不能将Dongle当优盘使用，不要往里面存放任何其他文件 4. 在拔出Dongle时，按照正常的优盘退出步骤进行 5. 电脑要经常杀毒，Dongle在被病毒感染的电脑上使用也存在被感染的危险。如果万一不幸，你不小心误删了里面的授权文件，也请不要惊慌，我们会尽量帮助你恢复正常使用。若需要恢复license.key文件，请将你购买时的合同号或者Dongle圆环上的编码发给我们。你也可以通过Dongle的USB ID来恢复。USB ID为16位，例如：AA04012700000XXX，下图所示的红色方框中的字符：将以上任何一样信息发到技术支持邮箱support flowjochina.com。 USB ID的查找办法如下： XP系统：我的电脑→右键→属性→硬件→设备管理器→磁盘驱动器，在磁盘驱动器中找到Dongle优盘，双击打开“属性”窗口，选择“详细信息”选项卡，如上图所示，得到USB ID WIN7系统：我的电脑→右键→属性→设备管理器→磁盘驱动器，在磁盘驱动器中找到Dongle优盘，双击打开“属性”窗口，选择“详细信息”选项卡; 个人分类: FlowJo使用|11705 次阅读|0 个评论

FlowJo中的公式编辑: FlowJo 2012-12-29 11:53; FlowJo中的公式编辑作者：蔡何青，FlowJo 技术专员在分析流式数据时可能会需要编辑一些公式，最常见的是计算两个参数的比率。比如在利用Indo-1测量钙离子流量的实验中，计算Indo-1 violet和Indo-1 blue这两个参数的比率（Figure 1）；在报告基因分析时，计算EGFP表达量和DsRed表达量之比（Figure 2）。在Figure 2中，流式仪上采集到的只有EGFP和DsRed的荧光参数，分析数据的时候需要的参数是EGFP/DsRed之比。这种情况下，可以使用FlowJo的衍生参数（Derived Parameters）功能，通过编辑公式新建EGFP/DsRed这个参数。以Figure 2为例，通过衍生参数功能添加EGFP/DsRed参数的步骤如下： 1. 到“Tools”菜单栏里选择“Derived Parameters”，新建一个衍生参数并命名为EGFP_DsRed_ratio 2. 编辑公式：在Insert Reference中选择FL1::EGFP，选择÷，再选择FL2::DsRed 3. 确定参数的属性：由于是荧光参数之间的比率，一般用Log轴；设置参数轴的最小值为0.01，最大值为1000 4. 选择Apply to group，将新建的EGFP/DsRed添加到该组实验的所有样本中。 5. 得到的EGFP_DsRed_ratio参数的点图和直方图如下图所示：在衍生参数功能中，还可以根据需要编辑许多公式，如下图所示：此外，在表格编辑器中也可以编辑公式，对得到的数据结果进行运算，比如在下面的抗体滴定实验的例子中，需要确定CD8-FITC抗体的最佳稀释浓度，可以通过CD8-FITC阳性细胞群和CD8-FITC阴性细胞群MFI（Median Fluorescence Intensity）的比率来确定。步骤如下： 1. 将CD8-FITC Median和CD8-FITC+ Median拖入表格编辑器，点击添加列按钮 2. 在Column Information窗口中选择Formula选项卡 3. 编辑公式，CD8-FITC+ Median除以CD8-FITC- Median 4. 点击OK确认 5. 在表格编辑器中点击Batch按钮进行批处理 6. 得到结果如下表，随着抗体浓度的增大，阳性群和阴性群MFI的比率不断增大，当抗体浓度增大到1之后，MFI ratio没有大的变化，因此可以确定最佳抗体稀释浓度为Sample 3所在的抗体浓度。; 个人分类: FlowJo使用|13078 次阅读|0 个评论

分选注意事项---以Aria为蓝本: ihs 2012-10-25 14:59; 一、特别注意 1. 安全性问题：由于在分选过程中，样本可能通过液滴震荡产生气溶胶，所以不接受会传播人类病原菌的生物有害样本，也不接受含放射性生物样品。 2. 应知道细胞的大小与形态，以便选择分选用喷嘴。所分选细胞的直径最好小于喷嘴直径的 1/5 ，至少小于 1/3 。细胞的形态也会影响了分选的结果，理论上越接近于球形的细胞，分选过程中的剪切力对细胞造成的伤害就越小。形态特殊的细胞应选择较大的喷嘴，以减轻分选过程对细胞造成的伤害。各种细胞的建议浓度和所用喷嘴如下表。 Table 1 细胞种类和浓度、喷嘴的选择细胞种类浓度喷嘴 Lymphocytes, thymocytes or splenocytes ( 直径 8-12 μm) 8 - 12 × 106 /ml 70μm Activated lymphocytes, smaller cell lines ( 直径 12-20 μm) 7- 9 × 106 /ml 85 μm Large adherent cell line ( 直径 20 μm) 5 - 8 × 106 /ml 100μm 二、样本制备 1. 样本制备基本流程：获取细胞悬液→荧光抗体染色→调整细胞浓度（参考 Table 1 ）→ 过滤细胞 →移入流式管→避光置冰上运至分选室→上机检测并设定分选条件→分选细胞→上机回测，检测纯度。注：分选前的细胞一定要过滤过（一般用 300 目滤网），否则会堵机器的。 2. 分选所用的细胞染色方法与分析所用方法基本相同，但需要注意以下几点： a）保证样本的无菌状态，因为分选得到的细胞还要继续培养； b）不能使用固定剂固定细胞，因为活细胞经固定剂处理后即死亡； c）保证上机样品为单细胞悬液； d）准备充足的细胞，详见 Table 1 ； e）建议分选上样管中的缓冲液使用含 2% FBS 的 PBS ，普通培养基中的酚红可能会干扰分选；若用培养基的话，颜色不能太深，血清浓度不能超过 2% ，否则粘性太大影响分选。 f）如细胞分选后需再次培养，请准备含血清的收集管，在分选前交操作员。建议在 5ml 离心管中加入 1-2ml 血清及其它必需组分，保证分选完毕时血清浓度大于 5% ； g）如要分选 GFP 等转染的样品，请提供未经转染的相同细胞为阴性对照； h）如要做多重荧光染色标本的分选，请提供各种单一荧光染色的标本； i）如要去除死细胞，在不影响后续实验前提下，可以加入 7-AAD 或是 PI ； j）快速简便的样本处理有利于分选：处理好的样本尽快上机，分选好的细胞尽快下一步实验，如果要分选多个样本，建议一次处理一个，估计可能的上机时间后，再处理第二个样本。四 . 常见问题 Q1. 上机样品需要溶在何种溶液中？是否可以就直接放在原本培养的培养基中？ Ans : 建议不要放培养基中，因为 Phenol Red 可能会影响分选的结果，可先尝试使用含 2%FBS 或 BSA 的 PBS 作为分选缓冲液。如要求更好的细胞存活率，按分选细胞的不同，选择不同的分选缓冲液。 1. 淋巴细胞（ HBSS 配方中的阳离子可增进细胞的生存力。如果这些细胞并非易于群集细胞，可以选用没有 EDTA 的缓冲液）。 a) 1 mM EDTA, 25mM Hepes (pH7.0) and 0.5% - 2% BSA in 1× PBS (without Ca2+ and Mg2+) b) 1× HBSS (without phenol red) with 1% BSA c) 0.5% - 2% BSA in PBS(without Ca2+ and Mg2+) 2. 贴壁细胞（以 Trypsin 处理后去准备单细胞悬浮液时，待细胞变圆 ( 切记不可过度作用 ) ，以适量含 5% 血清培养液收取细胞，并均匀地打散细胞悬浮液。离心后，用分选缓冲液调整细胞浓度。如果需要的话可以提高 EDTA 的浓度 ( 至 5mM) 以避免细胞重新黏聚）。 a） 5 mM EDTA, 25mM Hepes (pH7.0) and 0.5% - 2% BSA in 1× PBS (without Ca2+ and Mg2+) b） 0.5-2% BSA in PBS(without Ca2+ and Mg2+) 3. 含有高比例死细胞的样本（这些配方可减少因死细胞释放出来的 DNA 所造成的细胞黏聚现象。） 5mM MgCl2, 1 mM EDTA, 25mM Hepes (pH7.0), 25-50 μg/mL DNAase I and 0.5% - 2% BSA in 1× PBS (without Ca2+ and Mg2+) 4. 建议询问有经验者（使用相同细胞进行过分选）的分选缓冲液配方 Q2. 如果细胞要再培养，会污染吗？ Ans : 分选所用的所有溶液都经高温高压灭菌，流式分选仪管路使用 70% 乙醇定期清洗，仪器所在房间在每次分选前紫外灭菌，最后在细胞培养基中加入抗生素，可将污染机率降至很低。 Q3. 如果我想在分选后拿到 1×106 的细胞我应该一开始准备多少细胞去做分选？ Ans : 假设你要的细胞只占总数的 10% ，则你所需准备的细胞数如下公式 : 1×106=10%× 50% 回收率 × 20×106( 起始细胞数 ) ，所以你需要准备 2×107 细胞。高速分选、纯度模式 (purity vs. yield mode) 、部分细胞黏附于上样管壁、部分细胞用于样本分析、长时间分选过程中细胞的死亡等等，对会降低回收率。 50% 回收率是一个一般的参考值。 Q4. 通常做一次细胞分选需要多久时间？ Ans : 分选的过程有三个步骤，分别为设定分选区域、分选及分选后的分析。设定分选区域约需 15-20 分钟。分选的时间决定于细胞数目，虽然机器的分选速度最高可达 70,000 细胞 /sec ，但为得到最佳分选结果，我们通常设定分选速度为 10,000-20,000 细胞 / 秒。因此，如欲分选 2×107 细胞，其所需分选时间约为 17-34 分钟。分选后约需 15-20 分钟去回测及分析结果。所以，总共约需 1-1.2 小时去分选 2×107 细胞。 Q5. 一个样品可以同时分选出几种细胞 ? Ans : FACSAria 可以从一个样品中最多同时分选出四种不同的细胞。 Q6. 可以同时使用多少参数进行细胞分选？ Ans : FACSAria 最多可以根据 15 个参数去定义及分选一群细胞 ( 检测 488 nm 激光对应的 5 种荧光信号及 SSC 和 FSC ，监测 633 nm 激光对应的 2 种荧光信号，检测 375nm 激光对应的 2 种荧光信号，另有四个可扩充的空白通道 ) 。 Q7. 分选后细胞的纯度有多少？ Ans : 通常可以达到 95% 以上的纯度，如果所分选细胞可以和其他细胞群较好的区分。 Q8. 如果阳性的细胞占总数的 1% 以下，还可以做分选吗？ Ans : 可以，但是低含量细胞的分选会导致低纯度及低回收率。因此，我们建议使用者事先富集你感兴趣的细胞。细胞富集的方式可以是正选：如用磁珠法富集你感兴趣的细胞；也可以是负选，如利用 nylon wool 去除 B 细胞，或磁珠法去除不要的细胞。 Q9. 分选时所使用的管子有哪些？ Ans : 上样一般使用 5ml 带盖流式管 (BD Falcon tube #352003) ；收集可以使用下面这 2 种管， 14ml 圆底离心管 (BD Falcon tube #352059) ( 最多双路分选 ) ， 5ml 带盖流式管 (Falcon tube #352003) ( 最多四路分选 ) 。; 个人分类: 流式|5087 次阅读|0 个评论

FlowJo分析钙离子流量: FlowJo 2012-9-28 15:52; FlowJo分析钙离子流量作者：蔡何青，FlowJo 技术专员一、原理钙离子是机体的重要元素，同时作为细胞内第二信使通过与钙调蛋白（Calmodulin，CaM）结合激活多种蛋白激酶（如腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶、钙调蛋白激酶等）及诸多蛋白水解酶和核酸酶，从而参与包括细胞代谢、细胞周期等多种细胞功能的调节，在细胞的许多生命活动中担当着重要的角色。因此，钙离子测定在医学实验研究中有着重要意义。钙离子流量可以用多种实验方法监测，其中流式细胞技术监测钙离子是一种简单方便准确的方法，得到了很多应用。实验中，需要分析细胞内钙离子含量随时间变化的曲线。在流式采集的过程中，需要采集“Time”参数，在开始的1~2分钟内采集未刺激细胞的钙离子含量数据，然后加入刺激并采集刺激后的数据。实验的目的是为了测量刺激之后，细胞内钙离子含量随时间变化的过程，比较不同样本之间或者不同刺激之间钙离子含量变化的差异。具体的监测方法，请查看其它文献，此博文着重于采集钙离子流量流式数据之后，如何分析的问题。图A：X轴为“Time”（单位为秒），Y轴为钙离子含量参数（这个例子中为Indo Ratio），图中记录了整个持续时间内所有细胞的钙离子含量。图A是在FlowJo图形窗口中选择伪色图显示的，我们只能从图中看出刺激之后，钙离子含量变化的一个大致趋势。中间断层是加药物刺激的时间。在FlowJo的动力学平台“Kinetics”中可以进行其他的分析，比如查看median随时间变化的曲线，然后可以将不同样本之间的数据进行叠加比较。例如下面的图B和图C。图B中，X轴为时间，Y轴为荧光强度的中位数（median）。显示的是每一个时间点的细胞荧光强度的中位数，能够反映出刺激之后，细胞内钙离子含量随时间变化的趋势，而且可以在Layout布局编辑器中将不同样本之间的趋势图叠加在一起进行比较。除了median之外，Y轴还可以选择mean、geometry mean、percentile 图C中，Y轴为“% Cells Threshold”，显示的是：在某个时间点荧光强度大于阈值的细胞所占的百分比，比如在200秒的时候有大约90%的细胞的荧光强度在阈值之上。选择这种显示方式的时候，需要设置一个阈值（Threshold）。二、FlowJo分析钙离子流量的步骤演示数据：Kinetic Tutorial Data 1. 设门分析，找到目标细胞群 2. 在工作台中选中目标细胞群，到“Tools”菜单栏里选择“Kinetics”，打开动力学分析平台。 3. 打开“Options”菜单 3.1 在Statistic中选择Y轴显示的统计数据：常用的为“median”或者“% Cells Threshold”（下拉列表中的第5个），参考原理中的有关介绍 3.2 在Smoothing选项中选择曲线光滑的方式，可以对曲线进行光滑处理 4. 如果有需要，可以创建time-slice，也就是将整个变化曲线分成多个时间段，Kinetics平台能对每个时间段的数据进行统计。创建time-slice有三种方式，可以手动创建，也可以让软件自动创建创建time-slice之后，Kinetics平台如下图所示，在Statistics栏里生成了各个时间段的统计数据。 5. 结果输出：表格编辑器：进行统计数据的输出布局编辑器：图形叠加，图形输出等在具体的数据分析过程中，经常需要将不同样本的钙离子流量图叠加在一起，以便看出样本间的差异，比如下面的文献例子中的图。下面的例子中，需要将M1、M2、Naive细胞的钙离子流量图叠加在仪器，步骤如下： 1) 点击按钮，打开布局编辑器 2) 在工作台中，选中M1细胞群的“Kinetics”节点并将其拖进布局页， 3) 在工作台中，选中M2细胞群的“Kinetics”节点，将其拖到布局页中M1细胞群的图形上方，松开鼠标后二者重叠在一起 4) 同样的步骤，将工作台中Naive细胞群的“Kinetics”节点拖入布局页，得到所需要的重叠图。如果需要更改图形的长宽比例，先选中图形，选中图形的右下角并拖动鼠标，调整图形的宽高比，如下图所示： 5) 图片保存：点击按钮，选择文件保存的路径，并给文件命名。三、文献例子下图中比较了不同样本中的钙离子流量变化情况。文献中引用FlowJo的描述： Intracellular calciumconcentration was determined using the FlowJo kinetic function. 图片来自于： Julie Zikherman. 2009. PTPN22 Deficiency Cooperates with the CD45 E613R Allele toBreak Tolerance on a Non-Autoimmune Background. The Journal of Immunology; 个人分类: FlowJo使用|15509 次阅读|0 个评论

FlowJo应用常见问题及其解答: 热度 2 FlowJo 2012-7-25 13:27; FlowJo应用常见问题及其解答作者：蔡何青，FlowJo 技术专员 Basic Analysis 1.散点图中怎样调整坐标轴的范围（备注：只有FCS3.0格式的数据可以在散点图中调整坐标轴的范围。）点击坐标轴旁边的“T”按钮，选择“Change displayed parameter range”，在弹出的对话框中输入坐标轴范围的最小值和最大值。 2. 直方图中怎样调整Y轴的范围在图形窗口中打开“option”选项，在“Y Axis”中选择“Auto”或者“Manual”， Auto：自动，软件能自动调整Y轴的范围，将整个直方图显示出来 Manual：手动，需要在后面的“Max”选项中手动输入Y轴标度的最大值，然后按“回车键”确认。比如，在此例中需要将“Max”值设为160。备注：关于FlowJo调整坐标轴的详细内容请参考博文： FlowJo如何调整流式数据参数轴 3. 反向设门：怎样显示子细胞群在其祖先细胞群中的位置在布局页中右键单击某个细胞群的图，在弹出的下拉菜单中选择“Show Backgating” 4. 输出图形时怎样自动对齐在布局页中选中需要对齐的多个图形，到布局页的“排齐”菜单中选择对齐的类型，常用的有：顶端对齐(Tops)、底部对齐(Bottoms)、左对齐(Lefts)、右对齐(Rights) 5. 输出图片的格式有哪几种，哪种的分辨率最高可输出的图形格式有6种：PNG, JPG, GIF, SVG, EMF, PDF。其中，SVG为可缩放矢量图形，EMF格式可以在microsoftoffice里面进行编辑。在做图形输出的时候，如果是用作PPT的话，建议在FlowJo里面编辑完毕后再直接将完整的report输出到PPT，不建议在PPT里面做图形编辑。如果一定要在PPT做图形编辑的话，需将图片保存为EMF格式，这样可以在PPT2003版本里面做ungroup，进行单个编辑，不过图片插入PPT后，转变为PPT可识别的图，将会降低分辨率。如果是用作发表文章的话，建议将图片保存为PDF格式，再在专业的图片编辑器如Photoshop或者Illustrator里面进行编辑，再输出为杂志要求的文件格式，一般为JPG,现在也有杂志倾向于接收PDF图片。 FlowJo默认的图形输出格式为PNG格式，如果需要更改，到“编辑”菜单栏里选择“偏好设置文件格式”，在“布局编辑器”的输出格式类型中选择： 6. 是否可以调整伪色图中每个点所表示的细胞个数，即调整点的数目，使其分辨率更高不可以调整。但是Dot Plot可以调整。(具体内容请参考博文：如何比较不同细胞数目的流式数据？ ) 7. 应用模板分析数据时，导入数据之后，布局编辑器里的图形批处理结果显示为“No Population” 在这个例子中，在布局页中选择“Exp1”，然后点击“Batch”按钮，重新批处理一次，便可得到结果。 8. Mean, Median, Mode, Geom.Mean的区别 Mean：平均荧光强度 Median：荧光强度的中位数 Mode：众数，是一组数据中出现次数最多的数值 Geometric mean：几何平均数，是指n个观察值连乘积的n次方根，计算公式为：在标准的高斯分布情况下，Median=mean=mode. 通常在流式中因为总会有异常值（超高或者超低值）的存在，不是完美的高斯分布，建议使用Median，降低异常值对数据的影响。 9. 对于不同样本，目标细胞群所设的门的范围及位置不相同，是否影响可比性不影响。同一组实验中的不同样本，目标细胞群的位置和分布范围可能会有变化，在设门的时候，需要将目标细胞群都划在门内；而在分析数据的时候，是以统计学方法分析整个细胞群的分布情况，得到百分比以及平均荧光强度等数据。因此不会影响可比性。 Compensation 1.没有补偿对照单染管（单染样本或者单染Beads）是否可以用FlowJo调补偿不可以。不论是在仪器上调补偿，还是在软件比如FlowJo上调补偿，都必需在单染对照的基础上进行。 2. 实际实验的时候，单染管没有明显的双峰分布，应该怎么调补偿如果没有明显的双峰分布，在设门界定阴性群和阳性群的时候：应使用区域门进行设门，阴性群和阳性群之间的距离要尽量远一些，阴性群不要包含极低值区域，阳性群不要包含极高值区域。如下图所示：关于用FlowJo做软件补偿请参考博文： FlowJo软件荧光补偿 3. 怎样才能确定FlowJo的补偿矩阵的准确度？依据单染对照的散点图还是实验样本的？依据单染对照进行判定。以一个两色实验为例（FL1::CD3-FITC 和 FL2::CD4-PE），在补偿之后，如果单染对照（比如FITC单染）中FITC阳性群和FITC阴性群的中位数（Median of FL2::CD4-PE）一致，说明补偿准确。详细内容请参考博文：如何确定流式分析中荧光补偿是正确的呢？ 4. 双指数转换中的3个参数分别表示什么 Width Basis：宽度基底，为负值。在图形显示效果上反映了压缩的程度。在Logicle轴中，-10表示“-10 1 ~0段”以及“0~10 1 段”以线性形式显示，-100表示“-10 2 ~0段”以及“0~10 2 段”以线性形式显示，如下图：左图中Width Basis为-10，右图中为-100 Extra negative decades：附加负十进位，即在坐标轴中增加的负数段的数目。“1”表示增加1个负十进位段，如下图：红色方框中的部分为在坐标轴上增加1个负十进位段 Positive decades：正十进位，表示正十进位的数目。如下图所示：左图中Positive decades为4，表示有4个正十进位段：10 1 ~10 2 、10 2 ~10 3 、10 3 ~10 4 、10 4 ~10 5 。右图中Positive decades为7，表示有7个正十进位段：10 -2 ~10 -1 、10 -1 ~10 0 、10 0 ~10 1 、10 1 ~10 2 、10 2 ~10 3 、10 3 ~10 4 、10 4 ~10 5 。增大Positive Decades，能在二维图中以更大的空间显示低位段（0~10 1 ）的数据 Cell Cycle 1. RMS值位于哪个范围之内，周期分析结果可用 FlowJo没有给出一个确定的RMS值范围来判断周期分析结果是否可用。RMS反映的是FlowJo拟合结果和实际数据的吻合程度，吻合得越好，RMS值越小。在进行周期分析的时候，如果数据比较好，FlowJo能自动拟合得到一个好的周期拟合结果，RMS值很小。如果数据不是很理想，需要不断更改限制条件，使RMS值更小，模型拟合得更好。RMS是对同一个数据的不同拟合情况进行比较的，数值越小则拟合越好，不能用来比较不同数据间拟合的好坏。 2. CV值位于哪个范围之内，周期分析结果可用 FlowJo没有给出一个确定的CV值范围来判断周期分析结果是否可用。周期实验中CV值的大小主要是由流式仪的灵敏度及DNA染色剂的特异性决定的。 3.FlowJo拟合得到的CV值明显高于ModFit CV为变异系数，反映的是峰的宽度。ModFit在呈现数据的时候，是将荧光强度的范围归并为256个Channel，因此在分析任何数据的时候，其坐标轴的范围均为256。FlowJo则是呈现实际的荧光强度，坐标轴的范围依据具体数据的荧光强度来确定，大于256。因此FlowJo得到的CV值高于ModFit。下图中为同一个数据分别用ModFit和FlowJo进行分析得到的结果，左边为ModFit，右边为FlowJo。 4.FlowJo的周期模块中怎么分析凋亡 FlowJo的周期模块是专门用来分析细胞周期的，得到细胞周期各个时期的比例。分析细胞凋亡一般需要采用特定的方法，比如Annexin V-FITC/PI双标记法，用四分门设门方法来界定出凋亡细胞。具体内容请参考博文： FlowJo分析凋亡数据 5.FlowJo的周期模块中怎么分析异倍体 FlowJo在分析细胞周期的时候，能够得到某一个细胞周期各个时期的比例。如果样本中包含有多个不同的倍体（比如同时含有二倍体以及异倍体），该样本中含有多个细胞周期，则需要借助其他的分析工具来分析。 6. “创建门”之后，各个时期的比例发生变化创建门之前，计算细胞周期各个时期的比例是根据拟合方程计算出来的。左图为创建门之前的周期图，其中G1期与S期有相交部分，对于相交的部分，是根据方程计算出其属于G1期的可能性有多少，属于S期的可能性有多少，然后再计算出G1期细胞所占的总的比例。创建门之后，如右图，G1期、S期、G2期之间没有相交的部分，而是硬性地设了一个门，明确规定出G1期、S期和G2期的范围。因此，创建门之后，细胞周期各个时期的百分比会发生变化。如果周期分析的目的只是为了计算出细胞周期各个时期的比例，则不需要“创建门”。如果周期分析之后，需要界定出G1期、S期、G2期的细胞，并对某个时期比如G1期的细胞做进一步分析，则需要“创建门”界定出各个时期的细胞。更多关于周期分析的内容，请参考博文： FlowJo软件分析细胞周期样品 Porliferation 1 增殖分析发文章时采用哪个参数一般采用增殖指数（Proliferation Index）和分裂指数（Division Index） 2 增殖指数和分裂指数的定义及其区别和关系增殖指数（Proliferation Index）：分裂次数的总和除以发生过增殖的亲代细胞数目分裂指数（Division Index）：分裂次数的总和除以增殖发生前的细胞总数 3 为什么默认的增殖峰的最大值为8 根据以往的研究结果，在CFSE法分析细胞增殖的实验中，可分辨出的最多的增殖峰的数目为8个; 个人分类: FlowJo使用|107442 次阅读|2 个评论

常用流式仪荧光素的通道使用情况: FlowJo 2012-5-28 09:36; 常有用户来信问，做流式实验，采集信号的时候，某个荧光素应该在哪个通道采集。以下是一个列表，是常用流式仪荧光素的通道使用情况，可能对平时实验有一定的指导性作用。譬如7AAD 在Calibur上应该用第三通道采集。如果在Calibur上用PE-Cy5的话，不应该和第四通道的APC合用。; 个人分类: 流式知识|28232 次阅读|0 个评论

“流式细胞术的应用及数据分析”研讨会报名通知: 热度 3 FlowJo 2011-3-24 11:01; 流式技术的广泛应用引来了流式领域的革命性变化，但是相关的流式研讨会却不是很多，应广大用户的强烈要求，我们将于4月份在北京和上海举办流式研讨会。此次研讨会将主要侧重于流式技术的实际操作和应用及流式结果分析，将深入浅出，从简入难的讲解流式的方方面面，让你对流式技术及操作和结果分析有一个深入系统的学习。本次研讨会为期一天，将邀请国内在流式领域有着多年应用背景的专家为我们做流式的应用方面的介绍，同时来自全球知名的第三方流式软件公司－FlowJo亚太区负责人张千君老师介绍用流式数据分析知识及流式数据分析的方法和技巧，参与者有自己动手分析数据的机会(建议自带笔记本电脑)。现有的FlowJo用户及Accuri用户，可以获取免费参加名额。现场随会议资料附赠精美礼品一份（内含2G U盘或者精美T-shirt，FlowJo学习光盘，FlowJo免费使用序列号(6个月)。吉泰精美周历一份及其他小礼品）【课程内容】 9:30 －10:30流式细胞仪的理论介绍及上机操作介绍 10:45 －11:15 流式数据分析的对照设置及统计值应用 11:15 － 11:45 FlowJo的初级应用 12:00 －13:30 午餐(免费自助餐) 13:30－14:30 流式在生物医学方面的应用 14:45 －15:45 FlowJo的高级应用 16:00 －17:00 分组操作及讨论【课程对象】流式操作相关人员、研究生等【培训时间及地点】 2011年4月21号上海上海市徐汇区肇嘉浜路500号，好望角大饭店 2011年4月26号北京北京市海淀区北四环中路238号柏彦大厦303会议室具体举办的酒店地点，将在确定后通知报名的用户。我要报名 4月7号广州——暨南大学第二理工楼922会议室（2：30﹣4：30pm） 4月15号武汉——武汉大学基础医学院结构中心会议室（9：00～11：30） 4月18号成都——华西第二医院妇幼研究院4楼第2会议室（2：30﹣4：30pm）举行半天免费的FlowJo讲座。报名参加FlowJo免费培训讲座或者发送邮件至电子邮箱，咨询详情， contact@flowjochina.com 【培训费用】现场注册费用为490元, 提前注册390元/人(需在会议前3天回执及提交注册费用) 免费入场券：FlowJo用户，根据购买凭证 (FlowJo美国公司的invoice复印件，或者是FlowJo China, 艾米绿公司的购买合同复印件或加密狗白色圆环上的编码) 免费参加，每张购买凭证可以拥有1张免费入场券。 Accuri用户，根据机器的序列码同样可以获取免费1张入场券. 如果你是FlowJo或者Accuri用户，请在回执单上注明,并在会议之前向我们提供购买凭证。【汇款方式】户名：杭州艾米绿生物科技有限公司开户行：农业银行杭州滨江分行帐号： 045101040019054 *请在汇款时，注明你的名字，参加的会议地点，发票抬头及联系方式。参与者发票于会场登记时领取【举办单位】杭州艾美绿有限公司(FlowJo中国总经销) 吉泰生物科技有限公司坐席有限，报满即止，请及早报名。报名参加：流式研讨会 (上海/北京） FlowJo 免费培训讲座(广州/成都/武汉）; 个人分类: FlowJo 会议及讲座安排|4573 次阅读|2 个评论

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