一、产品简介：

过氧化氢（H₂O₂)是重要的活性氧之一，不仅具有损伤生物大分子、产生细胞毒害的能力， 而且还可以作为信号分子， 在生物和非生物胁迫应激、细胞程序性死亡以及生长发育调控过程中起重要作用。它与钛盐反应生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被浓硫酸溶解后，在波长415nm波长下有最大吸收峰。其颜色深浅与H₂O₂浓度成线性关系 。

二、试剂盒的组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、超声清洗仪、可调式移液器、丙酮、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备：

① 组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL丙酮，进行冰浴匀浆，转移至EP管中，用丙酮定容至1mL，8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL预冷丙酮，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用丙酮定容至1mL，8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测。

2、标准溶液的配制：把10mmol/mL（=10000μmol/mL）标准品母液用丙酮稀释成1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用丙酮适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、按照样本质量计算：

H₂O₂含量(μmol/g质量)=(x×V1) ÷(W×V1÷V)×D=x÷W×D

3、按细胞数量计算：

H₂O₂含量(μmol/10⁴ cell)=(x×V1) ÷(N×V1÷V)×D=x÷N×D

4、按液体体积计算：

H₂O₂含量(μmol/mL)=x×D=x×D

V：加入提取液体积，1mL；           V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；

W：样本质量，g；                    N：细胞数量，以万计；

D：稀释倍数，未稀释即为1。