FlowJo分析调节性T细胞

作者：胡金涛 

调节性T细胞（Treg）是抑制性T细胞内的一种功能亚群。Treg细胞是一群表达特征为CD4+CD25+Foxp3+的T淋巴细胞。Treg细胞来源于胸腺，占外周血CD4+T细胞的2%-10%。根据Treg的来源不同可以分为自然调节性T细胞（nTreg）和诱导产生的适应性调节T细胞（a Treg）两类。Treg细胞可以抑制T细胞增殖和分泌细胞因子，在防止发生自身免疫、控制肿瘤免疫和移植耐受方面发挥重要作用。Treg细胞缺陷或功能受损会引发很多自身免疫病，而Treg细胞增多则会抑制机体对病原体的免疫应答反应，因此，Treg细胞是一群重要的免疫调节细胞，在调节机体免疫应答中起着不可或缺的作用。

一、 FlowJo分析Treg细胞数据的过程

1.      把Treg细胞样品的原始数据拖入FlowJo软件，双击打开原始数据。如(图一)所示：

(图一)

X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析的细胞选择上图所示的淋巴细胞群进行分析。

2.      在SSC/FSC图中双击淋巴细胞群，

（图二）

X轴选择FITC-CD4, Y轴选择SSC,圈出CD4+的细胞。如（图二）所示：

3.      在FITC-CD4/FSC图中双击CD4+的细胞群，

（图三）

X轴选择PE-CD25, Y轴选择APC-Foxp3, 用四分门设门工具 设门。如（图三）所示。

二、Treg细胞结果分析

1.      结果分析的原则：检测Treg细胞一般采用三标记染色法。本实验中荧光抗体搭配如下：(CD4-FITC/CD25-PE/ Foxp3-APC)。Treg细胞来源于CD4+的细胞，分析时首先要圈出CD4+的细胞，在CD4+的细胞中分析双阳性细胞（CD25+ Foxp3+），从而实现分析Treg细胞（CD4+CD25+Foxp3+）。

2.      图三中Q2区域的细胞即为Treg细胞(CD4+CD25+Foxp3+)，检测的结果：8.62%。可以根据检测结果判断Treg细胞在调节机体免疫应答中的作用。

三、 Treg细胞结果输出

分析结果的输出根据最终的需求可以有多种输出方式

1.      在细胞周期分析窗口工具栏中选择“文件”并单击，选择下拉菜单中的“另存为”，选择保存位置、重新命名文件名以及文件保存的文件类型（SVG、PNG、EMF、JPG）。

2.    把上述样品的分析应用到组中，在Flow Jo软件界面中单击打开布局编辑器，在工作台的样品空间把“淋巴细胞结点和CD4+细胞结点”拖入布局编辑器中，单击布局编辑器右上角的Batch工具。输出整个实验组的数据。如（图四）所示：

（图四）

此博文中的原始FCS数据：原始FCS数据.zip

下载FlowJo分析数据：www.flowjochina.com

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