一、产品简介：

丙二醛（malondialdehyde，MDA）是由于生物体官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与生物体衰老及逆境伤害有密切关系。

MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用 532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、蒸馏水和冰。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；建议500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至532nm和600nm。

② 操作表：

3、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按组织样本质量计算：

MDA 含量(nmol/g 质量)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×10⁹]÷(W ×V1÷V)=16.13×ΔA÷W

2、按细胞数量计算：

MDA含量(nmol/10⁴ cell)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×10⁹]÷(N×V1÷V)=16.13×ΔA÷N

3、按液体体积计算：

MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×10⁹]÷V1=16.13×ΔA

V：加入提取液体积，1mL；                     V1：反应中样本体积，0.2mL；

V2：样本提取液与工作液总反应液体积，5×10^-4 L； d：比色皿光径，1cm；

ε：MDA 摩尔消光系数，155×10³ L/mol /cm        N：细胞数量，以万计；

W：样品质量，g；                          

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

1、按组织样本质量计算：

MDA 含量(nmol/g 质量)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×10⁹]÷(W ×V1÷V)=32.26×ΔA÷W

4、按细胞数量计算：

MDA含量(nmol/10⁴ cell)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×10⁹]÷(N×V1÷V)=32.26×ΔA÷N

5、按液体体积计算：

MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×10⁹]÷V1=32.26×ΔA

V：加入提取液体积，1mL；                     V1：反应中样本体积，0.2mL；

V2：样本提取液与工作液总反应液体积，5×10^-4 L； d：96孔板光径，0.5cm；

ε：MDA 摩尔消光系数，155×10³ L/mol /cm        N：细胞数量，以万计；

W：样品质量，g；                          

注意事项：

若是样本量极少的血清样本，可减少加样体积V1（如由200μL减至25μL，并用生理盐水或蒸馏水补齐200μL），则改变后的加样量V1需重新代入公式计算。