卵母细胞和早期胚胎S期及DNA复制之检测

实验目的：对卵母细胞的DNA复制和早期胚胎的S期的鉴定。

试剂耗材：

          （1）固定液：4%多聚甲醛；

          （2）PBS，4度保存，备用。

          （3）PBS+3%BSA，是为洗液。

          （4）PBS+0.3%Triton，是为透膜液。

          （5）BeyoClick™ EdU-488细胞增殖检测试剂盒。

          （6）封闭液：PBS+0.1% 吐温+1%BSA，过滤，四度保存。

          （7）洗液：PBS+0.1% 吐温，过滤，4度或室温保存。透膜液（PBS+0.1% 吐温+0.1%曲拉通）。

          （8）封片剂。

          （9）抗体：略。

          （10）DNA染料：Hoechst33342，Hoechst33258，PI，DAPI。

          （11）羊毛脂：不可用指甲油。（16）载玻片/盖玻片。（17）湿盒：暗盒加水。

          （12）培养皿/口吸管/台式显微镜等

实验样品：小鼠/人的裸卵或早期胚胎等（以裸卵为例）。

实验步骤：

          （1）将EdU用培养液稀释为10μM，分装，-20度保存。

          （2）将卵母细胞实验组，对照组在EdU培养液中处理2h-3h。

          （3）固定：4%多聚甲醛室温固定裸卵15分钟。

          （4）透膜，室温15分钟。

          （5）PBS+3%BSA洗液，清洗3次，每次5分钟。

          （6）在步骤（5）时，配制反应缓冲液。按碧云天试剂说明书配制，其中某些试剂可以分装。每次只需配制200微升，或者更少体积。

          （7）将（5）之裸卵放入（6）之反应液中，室温1小时。

          （8）洗液洗三次，染核。（如果想标记抗体，则在清洗三次后，封闭，孵育一抗，略）

          （9）封片。

问题分析：

          （1）此方法是检验细胞所处细胞周期阶段的快捷办法？

          （2）卵母细胞中的DNA复制？

          （3）卵丘细胞中的DNA复制？