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[转载]PCR产物扩增出现特异性差(引物二聚体严重、杂带)等情况,如何改进?

已有 8509 次阅读 2022-4-19 15:56 |系统分类:科研笔记|文章来源:转载

1 选择热启动酶

使用热启动酶可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,同时PCR反应体系需要在冰上进行配制,有助于得到高特异性的扩增结果。

2 优化反应体系与条件

适当提高退火温度、减少循环数、适当降低Mg离子工作浓度,根据具体的实验要求优化条件。还可以尝试某些特殊的程序,如巢式PCRTouchdown PCR等。

3 优化模板量

适当减少模板量,过量的模板也会导致非特异扩增,模板使用量请参考说明书。

4 优化引物

才适当延长引物,可提高引物与模板的结合效率,提高特异性;引物加入量过高也会导致非特异性扩增,引物使用量请参考说明书。

 

注:纯化PCR产物,PCR产物需要进行后续实验时,如果确定有目的条带扩增,可以凝胶回收目的条带。




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